激素類藥物主要包括雄激素、雌激素、孕激素、皮質(zhì)醇激素等。激素類藥物的應(yīng)用，能夠較為有效地提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益，但同時激素的濫用對人體健康的危害也是不容忽視的。一些養(yǎng)殖戶片面追求經(jīng)濟利益，從而過度使用激素類藥物，導(dǎo)致飼養(yǎng)動物體內(nèi)的激素嚴重超標，所生產(chǎn)的肉類食品中也有大量的激素殘留。如果食用這樣的肉類食品，也會造成人體自身激素紊亂，給人體健康造成很大威脅。

實驗部分

應(yīng)用范圍：動物源性食品/豬肉/豬肝/雞蛋/牛奶/牛肉/雞肉/蝦

檢測方法：液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

方法原理：試樣中的目標化合物經(jīng)均質(zhì)，酶解，用甲醇-水溶液提取，經(jīng)固相萃取富集凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標法定量

前處理儀器：電子天平（感量0.0001 g和0.01 g）；組織勻漿機；渦旋混合器；恒溫振蕩器；超聲清洗儀；離心機（10000 r/min）；固相萃取裝置；氮吹儀；pH計；移液器。

檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

實驗制備

1.動物肌肉、肝臟、蝦

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500g，剔除筋膜，蝦去除頭和殼。用組織搗碎機充分搗碎均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于-18 ℃以下冷凍存放。

2.牛奶

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，充分搖勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

3.雞蛋

從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g，去殼后用組織搗碎機充分攪拌均勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器中，密封，并標明標記，于0 ℃～4 ℃ 以下冷藏存放。

前處理方法

1.提取

稱取5g試樣（精確至0.01 g）于50mL具塞塑料離心管中，準確加入混合內(nèi)標溶液（100μg/L）100μL和10mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37℃±1 ℃振蕩酶解12h。取出冷卻至室溫，加入25mL甲醇超聲提取30min，0℃～4℃下10000r/min離心10min。將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯，加水100mL，混勻后待凈化。

2.凈化

分別用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3），6mL甲醇，6mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱（500mg，6 mL），將提取液以2mL/min～3mL/min的速度上樣。將小柱減壓抽干。再將用6mL二氯甲烷-甲醇（7+3）活化好的氨基固相萃取柱（500mg，6mL）串接在ENVI-Carb小柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗脫并收集洗脫液，取下ENVI-Carb小柱，再用2mL二氯甲烷-甲醇（7+3）洗氨基柱，合并洗脫液后在微弱的氮氣流下吹干，用1 mL甲醇-水（1+1）溶解殘渣，供儀器測定。

注意事項

1.激素類標準物質(zhì)及內(nèi)標用甲醇配成1.0 mg/mL標準儲備液，在-18 ℃以下避光保存，可穩(wěn)定使用12個月。

2.如果有條件，建議每種標準物質(zhì)使用其對應(yīng)的同位素內(nèi)標進行校正。實在沒有對應(yīng)的同位素內(nèi)標，選擇與其化學性質(zhì)Z近似的同位素內(nèi)標進行校正（參考國標方法）。

3.β-葡萄糖醛酸酶只能冷藏，不能冷凍保存，否則會失活。

4.由于上樣液比較多，可以自制一種可控流速的大針筒，固定在ENVI-Carb小柱上面，一次加上全部提取液，提高凈化富集效率。

5.由于檢測項目比較多，在濃縮過程中需要微弱氮氣緩緩吹至近干，控制溫度不高于35 ℃。

6.國標方法中激素類標準物質(zhì)比較多，需要根據(jù)檢測的項目，制定不同的色譜方法。如果檢測項目比較多，建議使用一根150 mm長的色譜柱進行分離。根據(jù)出峰時間，使用正負離子切換模式進行掃描，提高檢測效率。

參考文獻：

GB/T 21981-2008 動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

豬肉、豬肝、雞蛋、牛奶、牛肉、雞肉和蝦中激素類藥物殘留量測定的前處理流程圖

激素類藥物信息表