動物性食品中卡拉洛爾殘留量測定的前處理方法

卡拉洛爾的危害及檢測目的

卡拉洛爾又名咔唑心安，化學(xué)名4- (3-異丙胺基-2-羥丙氧基) 咔唑，屬β腎上腺受體阻斷劑，在獸醫(yī)臨床中常用于消除動物緊張，特別是在運(yùn)輸過程中防止因應(yīng)激導(dǎo)致的動物死亡。β腎上腺受體阻斷劑目前已成為臨床上常見的七類獸藥殘留之一，其代表性藥物卡拉洛爾常在動物屠宰前數(shù)小時內(nèi)注射使用，因此相對其他獸藥可能對消費(fèi)者造成的健康風(fēng)險(xiǎn)更高。因此我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥ZD殘留限量》中明確規(guī)定了卡拉洛爾在豬靶組織中的殘留限量。

本文闡述了如何將卡拉洛爾從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為ZD，依據(jù)行標(biāo)SN/T 4144-2015，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測項(xiàng)目：卡拉洛爾

應(yīng)用范圍：豬肉、魚肉、蝦肉、肝臟、腎臟、脂肪、奶、雞蛋和蜂蜜

GX液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

方法原理：試樣中的卡拉洛爾用甲醇（脂肪用乙酸乙酯-正己烷溶解提取）提取，提取液經(jīng)MCX柱凈化（脂肪用GPC凈化）后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法峰面積定量。

前處理儀器：

凝膠凈化色譜儀；電子天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；組織搗碎機(jī)；渦旋混勻器；氮吹儀；均質(zhì)機(jī)（10000 r/min）；離心機(jī)（6000 r/min）；具塞塑料離心管（50 mL）。

檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

樣品的制備與保存

1.肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、脂肪和水產(chǎn)品（魚肉、蝦肉）：取代表性樣品約500 g，用組織搗碎機(jī)搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識，于零下18 ℃下保存。

2.奶、蜂蜜、雞蛋：取代表性樣品約500 g，攪拌均勻后裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識，于4 ℃下保存。

前處理方法

1.提取

肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、魚肉、蝦肉

稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇，渦旋提取2 min，用均質(zhì)器（10000 r/min）均質(zhì)2 min，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?5 mL甲醇均質(zhì)提取一次。離心合并有機(jī)相，用水定容至50 mL，待凈化。

奶、蜂蜜、雞蛋

稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇，渦旋提取2 min，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?5 mL甲醇渦旋提取一次。離心合并有機(jī)相，用水定容至50 mL，待凈化。

脂肪

稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入20 mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）溶解并混勻，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?0 mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）溶解提取一次。離心合并有機(jī)相，用乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）定容至50 mL，待凈化。

2.凈化

肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、魚肉、蝦肉、奶、蜂蜜、雞蛋

MCX柱（60 mg/3 mL）依次用甲醇3 mL和水3 mL活化，加入5.0 mL待凈化液，用3 mL水淋洗，用抽空3 min。用5 mL 5 %三乙胺-甲醇洗脫，收集洗脫液，于40 ℃氮?dú)鉂饪s吹干，殘?jiān)?0 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈飽和正己烷脫脂，下層清液過0.45 μm濾膜，供液質(zhì)測定。

脂肪

凝膠滲透色譜條件

凝膠色譜凈化系統(tǒng)：Accuprep（J2）；

凝膠凈化柱：Bio-Beads S-X3（38 μm～75 μm），400 mm×25 mm（內(nèi)徑）；

流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）；

流速：5 mL/min；

收集時間：7 min~17 min。

凈化過程：

取10 mL待凈化液于GPC樣品管中，用GPC柱凈化，收集洗脫液，于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘?jiān)?0 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈飽和正己烷脫脂，下層清液過0.45 μm濾膜，供液質(zhì)測定。

國標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)

1.卡拉洛爾標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在0 ℃～4 ℃ 避光保存。

2.本方法使用甲醇提取兩次目標(biāo)化合物，陽離子交換柱富集凈化，相當(dāng)于0.5 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測（其中脂肪樣品用乙酸乙酯-正己烷提取兩次，再用GPC柱凈化，相當(dāng)于0.4 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測）。

3.MCX固相萃取過程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保證離子交換的效果。

洗脫過程中洗脫溶劑少量多次加入，可以增加洗脫率。

4.在GPC凈化過程中配合紫外檢測器使用，可以準(zhǔn)確監(jiān)測目標(biāo)化合物及雜質(zhì)的流出情況。

參考文獻(xiàn)

SN/T 4144-2015 出口動物源性食品中卡拉洛爾殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

圖1 肌肉、內(nèi)臟和水產(chǎn)中卡拉洛爾殘留量測定的前處理流程圖

 圖2 奶、蜂蜜和雞蛋中卡拉洛爾殘留量測定的前處理流程圖

圖3 脂肪中卡拉洛爾殘留量測定的前處理流程圖

文章來源：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ZX（https://www.gbw-china.com/)