【一文解決】氯丙嗪殘留測定前處理方法

2020-12-31 13:43:49 408閱讀次數

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豬腎和肌肉組織中氯丙嗪殘留量測定的前處理方法

氯丙嗪的危害及檢測目的

氯丙嗪屬于吩噻嗪類藥物，可作用于中樞神經系統，故被作為中樞多巴胺受體的阻斷劑，具有鎮靜、催眠、鎮吐、抗暈眩等功效。當前，氯丙嗪常被一些養殖戶違規添加至家畜飼料中，目的是通過YZ家畜運動來達到“短期育肥”的效果。或在家畜長途運輸過程中減少其應激反應，進而降低死亡率。氯丙嗪藥物的濫用造成其在動物體內大量殘留，并通過食物鏈進入人體，長期蓄積會引發人體食物中毒、肝臟和腎臟病變等，直接危害人體健康。目前，歐盟明令規定“不得在動物源性食品中檢出氯丙嗪”。我國也對氯丙嗪進行了嚴格的限制，2020年生效實施的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥ZD殘留限量》中規定了氯丙嗪允許作ZL使用，但不得在動物性食品中檢出。

本文闡述了如何將氯丙嗪從樣品基質中分離提取出來，并經過凈化后，轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為ZD，依據國標GB/T 20763-2006，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：氯丙嗪

——————應用范圍：豬腎/肌肉組織——————

液相色譜-串聯質譜法

方法原理：氯丙嗪在堿性條件下用特丁基甲醚提取，并通過向提取液中加入磷酸鹽緩沖液（pH =3），使氯丙嗪被提取到緩沖溶液中，并用特丁基甲醚凈化緩沖溶液，改變緩沖溶液為堿性，將氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，濃縮，定容。供液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。

前處理儀器：電子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；離心機（ZD轉速為10000 r/min）；離心管（錐形底玻璃離心管15 mL和10 mL具塞；錐形底聚丙烯離心管50 mL具螺旋蓋）；過濾器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龍膜0.2 μm×47 mm）；液體分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流動相過濾裝置；氮氣濃縮儀；高速渦流混合器；振蕩器；食物調理機；一次性移液管；酸度計（測量精度為±0.02 unit）；超聲波儀；一次性注射器（1 mL）；試樣瓶（2.0 mL）。

檢測儀器：HPLC-MS/MS+ESI源

試樣制備

豬腎要去除脂肪和其他的非腎臟組織，豬肉要去皮和骨頭。將其絞碎拌勻。分出0.5 kg作為試樣，將制備好的試樣密封，并做上標記。將試樣置于-18 ℃條件下貯存。

前處理方法

1.提取

稱取試樣2.00 g（精確到0.01 g）放入50 mL聚丙烯離心管中，加入200 μL乙腈進行渦流混合，混合后加入400 μL 5 mol/L氫氧化鈉溶液，并進行渦流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期間，要對每個測定樣品進行兩次渦流混合。1 h后，將樣品從水浴中取出并冷卻至室溫。加入12 mL特丁基甲醚，置于振蕩器上高速振蕩15 min，離心15 min（轉速為4000 r/min）。吸出上清液，定量將特丁基甲醚轉移到干凈的15 mL玻璃離心管內，待凈化。

2.凈化

將上述15 mL離心管中加入1 mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH=3）3 mL，振蕩10 min，離心10 min（4000 r/min）。將特丁基甲醚層吸出棄去。在磷酸鹽溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振蕩5 min，離心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚層，棄去。然后再在磷酸鹽緩沖溶液中加入2 mL特丁基甲醚重復上述步驟。加入1 mL 5 mol/L氫氧化鈉溶液搖勻后加入10 mL特丁基甲醚，振蕩15 min，離心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚轉移到干凈的10 mL離心管中。在40 ℃條件下用氮吹儀蒸發至干。在濃縮至干的提取物中加入1000 μL流動相溶液，進行渦流混合，超聲處理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式過濾器過濾樣液，將樣液轉移到試樣瓶中，供液相色譜-串聯質譜儀測定。