尼卡巴嗪的危害及檢測(cè)目的

尼卡巴嗪（Nicarbazin）又名球蟲凈，1955年由美國(guó)Merck公司開發(fā)，具有GX、廣譜抗球蟲活性，預(yù)防效果很好，且耐藥性發(fā)展極慢，至今仍然是Z有效的抗球蟲藥之一。尼卡巴嗪是4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）與2-羥基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）的復(fù)合物。HDP在動(dòng)物體內(nèi)由尿液排出，代謝迅速。而DNC通過糞便排出，代謝緩慢，因而在肌肉及其他組織中會(huì)出現(xiàn)不同程度的殘留，人們食用后會(huì)產(chǎn)生潛在危害。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織以及新西蘭、日本和我國(guó)等均以DNC單體作為尼卡巴嗪的殘留標(biāo)志物。為規(guī)范尼卡巴嗪在養(yǎng)殖雞群中的用藥，2020年我國(guó)生效實(shí)施的GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥ZD殘留限量》中規(guī)定了DNC在肉雞不同組織中的ZD殘留限量。

本文闡述了如何將4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測(cè)的形式。以提取、凈化為ZD，依據(jù)國(guó)標(biāo)GB 29690-2013，為檢測(cè)人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測(cè)項(xiàng)目：4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）

應(yīng)用范圍：雞肌肉/雞蛋

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

方法原理：試料中殘留的4,4’-二硝基均二苯脲，用乙腈提取，正己烷除脂，75 %甲醇水溶液萃取，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

前處理儀器：

分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；渦旋振蕩器；離心機(jī)；氮吹儀；離心管（50 mL）；濾膜（0.2 μm）。

檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源

試樣制備與保存

1.雞蛋

取適量新鮮或冷藏的空白或供試雞蛋，去殼，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料；

取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料；

取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。

2.雞肌肉

取適量新鮮或冷凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料；

取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料；

取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。

前處理方法

提取與凈化

稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，添加10 μg/mL 4,4’-二硝基均二苯脲-D8標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，加無水硫酸鈉2 g，乙腈8 mL，渦旋0.5 min，超聲5 min，5000 r/min離心10 min，取上清液，于40 ℃氮?dú)獯蹈桑?5 %甲醇水溶液飽和的正己烷1 mL，渦旋10 s，再加75 %甲醇水溶液1.0 mL，充分渦旋混合，于40 ℃水浴中靜置5 min，2000 r/min離心5 min，取下層清液，濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

國(guó)標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)

1.DNC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個(gè)月；DNC-D8標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個(gè)月。

2.前處理過程中使用乙腈提取目標(biāo)化合物，無水硫酸鈉除水，正己烷除脂。

3.前處理過程中注意控制水浴溫度不超過40 ℃，防止目標(biāo)化合物降解。

4.上清液濃縮后，加入正己烷和定容液，需要充分渦旋混合進(jìn)行液液分配萃取，保證除脂效果；水浴靜置過程中觀察分層情況，可以適當(dāng)延長(zhǎng)靜置時(shí)間，保證水相與有機(jī)相分離完全。

5.同位素內(nèi)標(biāo)加入量決定ZZ定容后的理論上機(jī)濃度，務(wù)必與配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線中各點(diǎn)同位素的濃度相一致，才能正確校正回收率。

6.液質(zhì)聯(lián)用儀負(fù)離子掃描檢測(cè)，為保證檢測(cè)靈敏度，建議正負(fù)離子掃描分開儀器進(jìn)行。

參考文獻(xiàn)

GB 29690-2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中尼卡巴嗪殘留標(biāo)志物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法