氯霉素類藥物的危害及檢測目的

氯霉素類藥物主要包括氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，又稱為酰胺醇類，屬于廣譜抗生素，對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有yi制作用。由于氯霉素合成容易價格低，ZL食品動物傳染性疾病效果較好，所以有在養殖過程中使用氯霉素的違法行為，從而造成動物源性食品中氯霉素殘留。研究證明氯霉素可引發人體造血系統疾病，產生細菌耐藥性等危害。2020年我國農業農村部公告第250號，將氯霉素及其鹽、酯列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》中。

本文闡述了如何將氯霉素類藥物從樣品基質中分離提取出來，并經過凈化后，轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為ZD，依據國標GB/T 22338-2008，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：氯霉素類藥物

應用范圍：動物源性食品/水產品//畜禽產品/畜禽副產品

液相色譜-質譜/質譜法

方法原理：針對不同動物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素殘留，分別采用乙腈、乙酸乙酯-yi醚或乙酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱進行凈化，液相色譜-質譜/質譜儀測定，氯霉素采用內標法定量，甲砜霉素和氟甲砜霉素采用外標法定量。

前處理儀器：

高速組織搗碎機；均質器；旋轉蒸發儀；分析天平；移液槍（200 μL 和1 mL）；心形瓶（100 mL 棕色）；分液漏斗（200 mL）；聚四氟乙烯離心管（50 mL）；離心機；渦旋混合器；固相萃取裝置。

檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

試樣制備

從原始樣品中取出部分有代表性樣品，經高速組織搗碎機均勻搗碎或混勻，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內，加封后作出標記，一份作為試樣，一份作為留樣，于-20 ℃條件下保存。

前處理方法

1.提取

動物組織（肝、腎除外）與水產品

稱取試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液和30 mL乙腈，勻漿，離心5 min。將上清液移入250 mL分液漏斗中，加15 mL乙腈飽和的正己烷，振蕩5 min，靜置分層，轉移乙腈層至100 mL棕色心形瓶中。殘渣中再加入30 mL乙腈，振搖3 min，離心5 min，取上清液轉移至同一分液漏斗，振蕩5 min，靜置分層，轉移乙腈層至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5 mL正丙醇，于40 ℃水浴中旋轉蒸發近干，用氮氣吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解殘渣。

動物肝、腎組織

稱取試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入30 mL乙酸鈉緩沖液（0.1 mol/L pH 5.0），均質2 min，加入300 μL β-葡萄糖醛酸苷酶，于37 ℃溫育過夜。消解樣品中加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，20 mL乙酸乙酯-yi醚（75+25），振搖2 min，離心5 min。取上層有機層入心形瓶中，在40 ℃水浴中旋轉蒸發近干，用氮氣吹干，加5 mL丙酮-正己烷（1+9）溶解殘渣。

蜂蜜

稱取蜂蜜試樣5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入100 μL氯霉素氘代內標（氯霉素-D5 0.1 μg/mL）工作溶液，5 mL水，混勻，再加入20 mL乙酸乙酯，振搖2 min，離心5 min，移取有機層到100 mL棕色心形瓶中，于離心管中再加入20 mL乙酸乙酯，振搖2 min，離心5 min，合并有機層于棕色心形瓶中，40 ℃水浴中旋轉蒸發至干，3 mL水溶解殘渣，混勻。

2.凈化

動物組織與水產品

用5 mL丙酮-正己烷（1+9）淋洗LC-Si硅膠小柱，棄去淋洗液，將殘渣溶解溶液轉移到固相萃取小柱上，棄去流出液，用5 mL丙酮-正己烷（6+4）洗脫，收集洗脫液于心形瓶中， 40 ℃水浴中旋轉蒸發至近干，氮氣吹干，用1 mL水定容，定容液過0.45 μm濾膜至進樣瓶，待測定。

蜂蜜

分別用5 mL甲醇，5 mL水活化EN固相萃取柱，將提取液轉移上柱，用5 mL水淋洗，用玻璃棒壓干1 min，用3 mL乙酸乙酯洗脫，洗脫液用氮氣吹干，用1 mL水定容，定容液過0.45 μm濾膜至進樣瓶，待測定。

國標解讀及注意事項

1.氯霉素類標準物質用乙腈配成500 μg/mL標準儲備液在4 ℃避光條件下保存可以使用6個月。

2.不同的基質使用不同的提取和凈化方法，注意內臟組織需要酶解，β-葡萄糖醛酸苷酶只能冷藏，不能冷凍保存，否則會失活。

3.用水定容后，采用渦旋加超聲方式復溶，可以提高復溶效果。

4.由于質譜檢測過程中掃描方式為負離子掃描（ESI-），建議專門使用一臺液質儀，只進行負離子掃描的檢測，保證檢測靈敏度。

5.可以在前處理過程中加入甲砜霉素和氟甲砜霉素相對應的同位素內標物質，校正回收率。

參考文獻:GB/T 22338-2008 動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定

動物組織（肝、腎除外）與水產品中氯霉素類藥物殘留量測定的前處理流程圖

動物肝、腎組織中氯霉素類藥物殘留量測定的前處理流程圖

蜂蜜中氯霉素類藥物殘留量測定的前處理流程圖

*氯霉素類藥物信息表

壇墨質檢對應相關標物

購買咨詢

聯系方式

北方地區王宏姝：13671388957

南方地區汪麗紅：13501101929

上海地區朱愿福：17317378648