動物性食品中β-受體激動劑殘留的檢測
迪馬科技

　　β-受體激動劑能促進脂肪分解，抑 制脂肪沉淀，顯著提高酮體的瘦肉率，因此曾被用作畜禽的促生產劑。但這類藥物易在動物體組織內殘留，通過食物鏈進入人體，引起食物中毒。我國自2002起，已經將鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等列為禁用藥品，并列入年度例行監測計劃。

迪馬科技參考國標GB 31658.22-2022，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，測定動物性食品中β-受體激動劑的殘留，該方案通過對動物性食品酶解、高氯酸沉淀蛋白，經乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取，ProElut PXC凈化, Inspire PFP色譜柱分離檢測，回收率在70%-120%之間。

本方案具有提取方法回收率高、凈化效果優異、方法穩定性好等優點。

 1、適用范圍

本方案適用于豬肉、豬肝中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、西馬特羅、齊帕特羅、氯丙那林、特布他林、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、班布特羅、克侖丙羅、妥布特羅、利托君、克侖賽羅、馬噴特羅、克侖潘特、羥甲基克侖特羅共18種β-受體激動劑單個或混合物殘留量的檢測。

2、標準品

(1) 混標儲備液：精密稱取適量克倫特羅等標準品，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為100μg/mL混標儲備液(Cat.#: 47936)；

(2) 混標中間液Ⅰ：準確吸取適量混標儲備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL混標中間液；

(3) 混標中間液Ⅱ：準確吸取適量混標中間液Ⅰ，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.01μg/mL混標中間液；

(4) 內標儲備液：精密稱取適量克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西馬特羅-D7、齊帕特羅-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特羅-D9、鹽酸馬布特羅-D9、鹽酸班布特羅-D9、克侖丙羅-D7、鹽酸妥布特羅-D9、羥甲基克侖特羅-D6，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為10μg/mL內標儲備液；

(5) 內標工作液：準確吸取適量內標儲備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL內標工作液。

3、提取

(1) 稱取樣品2.0g于50mL塑料離心管中，加6mL 0.2mol/L乙酸銨緩沖液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，渦旋混勻，37℃避光水浴16h，放置室溫，備用；

(2) 取備用液，加100μL內標工作液，渦旋混勻，8000rmp離心8min，取出上清；

(3) 向下層殘渣加入5mL 0.1mol/L高氯酸溶液，渦旋5min, 8000rmp離心8min，取上清,與步驟(2)上清混勻，用高氯酸調pH值至1.0±0.2，8000rmp離心8min，取出上清；

(4) 將上清液用10mol/L NaOH溶液調pH值至10.0±0.5；

(5) 加乙酸乙酯15mL，渦旋5min, 5000rmp離心5min，取上層有機相；

(6) 下層水相中再加入10mL叔丁基甲醚，渦旋5min, 5000rmp離心5min，取上層有機相；

(7) 合并兩次有機相，混勻，50 ℃水浴氮吹至干，用5mL 2%甲酸溶液超聲1min,渦旋1min溶解殘渣，備用。

注：0.2mol/L乙酸銨緩沖液：取乙酸銨15.4g,溶解于1000mL水中，用乙酸調pH值至5.2；

0.1mol/L高氯酸溶液：取高氯酸8.7mL，用水稀釋至1000mL。

 4、凈化

ProElut PXC 60mg/3mL (Cat.#: 68203)

(1)活化：用3mL甲醇和3mL 2%甲酸溶液活化小柱；

(2)上樣：將備用液全部上柱，棄去流出液；

(3)淋洗：用3mL水和3mL甲醇淋洗小柱，棄去流出液，推干；

(4)洗脫：用3mL 5%氨水甲醇洗脫小柱，推干，接收流出液，混勻；

(5)重新溶解：將流出液在50℃水浴氮吹至近干，用0.5mL 甲醇-0.1%甲酸水(1:9)溶解殘渣,混勻，過尼龍膜(Cat.#: 37177)，上機分析。

5、分析條件

UPLC 條件

色譜柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流  速：0.3mL/min

進樣量：5μL

柱 溫：35℃

流動相：A: 0.1% 甲酸水溶液 B: 0.1% 甲酸乙腈

質譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測方式：多反應監測

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃

注：溴布特羅、利托君、克侖賽羅、馬噴特羅和克侖潘特采用萊克多巴胺同位素內標定量，如果有5種藥物一一對應的同位素內標，優先采用。

6、添加回收結果

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