摘要：

天然糖肽類抗生素替考拉寧常用于治 療嚴重的革蘭氏陽性細菌感染，可被靜脈注射，肌肉注射，局部使用(眼部感染)，或口服。它也被認為是靶向SARS-CoV-2病毒感染的潛在藥物。在PBS緩沖液(pH 6.8, I = 0.10 M)中，使用分析型超速離心機結合毛細管(滾球)粘度測定法，用沉降速率（SV）和沉降平衡（SE）法測定替考拉寧 A2亞型（M1 = 1880 g/mol）的流體力學參數。在一定濃度范圍內，0–10 mg/mL替考拉寧 A2亞型能夠穩定的產生> 1 mg/mL的自聚集，其摩爾質量為(35,400 ± 1000) g/mol，對應(19 ± 1)個單體。沉降系數S20, w = ~ 4.65 S，粘度（η）為(3.2 ± 0.1) mL/g。S20, w和動態光散射的數據都表明其形成為球狀的大分子，其動態水合作用的膨脹率~大約為2。

目的：對替考拉寧A2亞型的分子量和自聚集情況進行分析

儀器型號：Optima XL-I 

左圖：從0 ~到5 mg/mL下替考拉寧的沉降系數分布。

右圖：替考拉寧的平均摩爾質量隨濃度的變化情況。

實驗條件：

SV：20.0℃下，使用干涉檢測器和藍寶石窗口。將替考拉寧樣品(400 μL)和參比溶劑(420 μL PBS)加入到12 mm雙扇中心件中。以47500 rpm的轉速離心約24小時。采用SEDFIT最小二乘、ls-g*(s)方法處理得到的數據¹。

SE：7℃下，使用12毫米雙扇形環氧樹脂中心件，溶液和溶劑體積相同(100 μL)，轉速45000 rpm，運行時間約48 h。記錄平衡狀態下替考拉寧的濃度分布，隨后用SEDFIT-MSTAR算法。由于替考拉寧的非理想性可以忽略不計，我們認為表觀平均質量摩爾質量M _w,app近似等于真實平均摩爾質量M_w. SE (和SV)實驗使用多重濃度進行重復實驗。

REFERENCE

1.Dam, J. & Schuck, P. Calculating sedimentation coefficient distributions by direct nmodeling of sedimentation velocity concentration profiles. Methods Enzymol. 384, 185–212 (2004).

2.Schuck, P. et al. SEDFIT–MSTAR: molecular weight and molecular weight distribution analysis of polymers by sedimentation equilibrium in the ultracentrifuge. Analyst 139, 79–92 (2014).

Hydrodynamic characterization of a vesicular stomatitis virus-based oncolytic virus using analytical ultracentrifugation

使用分析超速離心對基于水皰性口炎病毒的溶瘤病毒進行流體動力學表征

發表日期：3 May 2023

DOI:https://doi.org/10.1007/s00249-023-01649-w

摘要：

測定病毒顆粒大小、密度和質量可以為支持臨床開發中的工藝和制劑研究提供有價值的信息。分析超速離心（AUC）作為第 一性原理的方法，已被證明是表征非包膜腺相關病毒（AAV）的有力工具。在這里，我們證明了AUC適用于表征有挑戰性的包膜病毒，包膜病毒通常比非包膜病毒表現出更高的分散性。具體而言，基于水皰性口炎病毒（VSV）的溶瘤病毒VSV-GP通過測試不同的轉子速度和負載濃度來評估非理想沉降的可能性。通過密度梯度和密度對比實驗確定部分比容。此外，納米顆粒跟蹤分析（NTA）用于確定VSV-GP顆粒的流體動力學直徑，以通過Svedberg方程計算其分子量。總體而言，本研究表明AUC和NTA適用于表征包膜病毒（即VSV-GP）的大小，密度和摩爾質量。

型號：Beckman Coulter Optima分析超速離心機

材料 A、B、C. A 的 AUC 表征結果。

a. 6000 rpm 時的沉降系數分布轉換為基于水條件

b. 材料 A 在 620 和 980S 之間的峰值積分的平均 s 值，具體取決于加載消光信號。

c. 根據加載消光信號，材料A剩余分布部分碎片和低聚物的綜合相對分數。符號表示轉子速度，顏色提供有關亞種類型的信息，即低聚物或碎片。

AUC實驗條件：

對于所有實驗，使用An50-Ti轉子，并在20°C下進行實驗。SV實驗使用樹脂雙扇區中心件進行。

Analytical ultracentrifugation in colloid and polymer science: new possibilities and perspectives after 100 years

膠體和聚合物科學中的分析超速離心：100年后的新可能性和新視角

發表日期：22 May 2023

DOI:https://doi.org/10.1007/s00396-023-05130-0

摘要：

分析超速離心（AUC）是Theodor Svedberg在100年前發明的一種經典的聚合物和膠體分析技術。現代的硬件和軟件以及強大的計算機使得現在有可能開發出超越以前這種技術的方法。該觀點旨在描述新的可能性，將AUC的可能性擴展到沉降系數、粒徑和摩爾質量分布以及相互作用系統的化學計量和相互作用常數的經典測定之外。所討論的主題包括顆粒尺寸和光學性質分布的高分辨率同時表征、AUC樣品池中反應的研究、極高濃度下顆粒相互作用的表征，以及在大濃度范圍內甚至跨越相邊界的復雜流體或滲透壓的表征。他們表明，即使經過100年的成功應用，AUC在膠體和聚合物科學中仍有許多尚未探索的潛力。

目的：在本文中，不僅將討論使用新的多波長檢測器的可能性，還將討論強大的AUC評估軟件的能力，該軟件可以產生幾乎原子分辨率的粒度分布，以及研究AUC中化學反應的方法，膠體狀態方程的確定，高濃度分散體中的相互作用分析或復雜流體的分析。其中一些方法并不新鮮，但可以從現代AUC的新硬件和軟件開發中獲益匪淺。

型號：Beckman Optima XL-I; Optima XL-A

實驗數據：

圖1：BSA-DNA混合物光譜信息，顯示了DNA和BSA的各種混合比例的實例。檢測到的MWL-AUC信號可以與左上角所示矩陣中的DNA（紅色）和BSA（藍色）的消光光譜L去卷積。這樣，可以從MWL沉降曲線中提取僅屬于兩個組分中的每一個的數據，并且可以計算每個組分的沉降曲線。經Elsevier許可，轉載自參考文獻[2]

圖2：左圖：上圖：2DSA-Monte Carlo分析后，50:50 DNA–BSA混合物的沉積剖面作為波長函數的3D視圖。4.3S處的蛋白質吸收光譜（兩個黃色峰）可以清楚地與吸光度最 大值約為258nm的DNA峰區分開。次要物種可以根據它們的光譜來識別。下圖：作為50:50 DNA–BSA混合物波長函數的2DSAMonte Carlo沉積曲線的投影圖。右圖：在開放AUC MWL儀器上分析的六種不同DNA和BSA混合物的分解結果的全局遺傳算法Monte Carlo分析（左上）和從Beckman Coulter XL-A獲得的雙波長結果（右圖）。將DNA（紅色）和BSA（藍色）的單獨分解結果組合在左側面板的偽3D圖中，以說明通過光譜分解實現的異常分離，該光譜分解甚至分離出具有幾乎相同沉積系數的物種（兩個主要物種在5 S附近沉積）。與在Beckman Coulter XL-A（右圖，綠色）上進行的全局雙波長分析相比，該方法證明了從MWL分析獲得的優越分辨率。下圖：來自上述相同數據的差異分布，紅色：DNA的分解，藍色：BSA的分解，綠色：DNA-BSA混合物的未分離XL-A數據，全局轉移到Monte Carlo分析。經Elsvier許可，轉載自參考文獻[2]

總結：

在分析超速離心發明100年后，事實證明，它比以往任何時候都更強大。從100年前Svedberg時代的平均沉降、擴散和摩擦系數以及平均摩爾質量的測定，到如今這些量的整體分布的常規測定，還有很長的路要走。此外，目前還可以獲得一些進一步的物理化學性質。AUC性能實現這一巨大飛躍的主要原因是數字數據采集，它允許通過計算機進行評估，計算機的功能迅速增強。這導致開發了幾個非常強大的軟件包來評估AUC數據。但是，硬件的改進，如多波長紫外-可見吸收和熒光檢測器，具有非常高的潛力，因為它們在AUC實驗中打開了一個額外的光譜軸，這允許獲得比以前所有傳統AUC實驗更多的信息。

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