Comparative hydrodynamic characterisation of two hydroxylated polymers based on α?pinene?or oleic acid?derived monomers for potential use as archaeological consolidants

具有潛在考古固化劑用途的基于α -蒎烯和油酸衍生單體的兩種羥基化聚合物的流體動力特性對比

發表日期：01 November 2022

DOI：https://doi.org/10.1038/s41598-022-21027-4

摘要：

出土于挪威奧塞貝格海盜船墓葬的木制工藝品是迄今為止發掘的最 具代表性的維京木制工藝品之一。在二十世紀早期，這些工藝品大都用明礬處理過，起保護作用的明礬也是導致它們目前破敗狀態的原因。因此，開發新的生物聚合物來保護這些工藝品，防止其進一步分解是至關重要的。我們采用α-蒎烯和油酸衍生單體與丙烯酸酯功能化合成出兩種羥基化聚合物(TPA6和TPA7)。然后使用生物分子流體力學方法(分析超離心和高精度粘度儀)測定這些聚合物的特性，結果表明它們有成為很好的木材固化劑的潛質。使用通用的流體力學參數粘度變量(ν)進行構象分析，ELLIPS1軟件分析結果顯示兩種聚合物都有延伸的構象，用于木材時，便于形成網狀結構。SEDFIT-MSTAR沉降平衡數據表明TPA6和TPA7的加權平均摩爾質量（Mw）分別為(3.9±0.8)kDa和(4.2±0.2)kDa。然而，用SEDFIT(沉降速度)和MultiSig分析顯示TPA7有更好的同質性和更低的聚集比例。這些研究表明這兩種聚合物，特別是TPA7，具有適合木材固化的特性，例如最 佳的摩爾質量，構象和羥基化性質，使它們成為進一步研究的潛在物質。

目的：表征羥基化聚合物的均一性和相對分子質量

儀器型號：Optima XL-I

A：SV實驗對TPA7的均一性和聚集性進行表征，B：SE實驗對TPA7的相對分子質量進行量化。

實驗條件：

SV實驗：0.5 到 4.0 mg/mL 的TPA6和 TPA7 溶解在異丙醇里。樣品池中加入405 μL樣品。異丙醇作為對照溶液。使用49000 rpm的轉速對樣品進行離心過夜。通過SEDFIT程序對數據進行分析。

SE實驗：0.5 到 4.0 mg/mL 的TPA6和 TPA7 溶解在異丙醇里。六孔中心件樣品池中加入100 μL樣品，異丙醇作為對照溶液。在45000轉/分的轉速下進行離心，持續2天。用SEDFIT-MSTAR計算平均摩爾質量(Mw,app) 。

REFERENCE

Dam, J. & Schuck, P. Calculating sedimentation coefficient distributions by direct modeling of sedimentation velocity concentration profiles. Methods Enzymol. 384, 185–212 (2004).

Truncated glycoprotein E of varicella-zoster virus is an ideal immunogen for Escherichia coli-based vaccine design

水痘-帶狀皰疹病毒截斷糖蛋白E是一種基于大腸桿菌表達系統設計的理想疫苗

發表日期：February 9, 2023

DOI: https://doi.org/10.1007/s11427-022-2264-1

摘要：

水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)是引起水痘和帶狀皰疹疾病的高度傳染性病原體。盡管有效性高，但已獲許可的疫苗仍存在安全性問題。因此本研究試圖使用大腸桿菌表達系統生產VZV gE免疫原。研究發現，gE蛋白的表達效率和產量可以通過對該蛋白的c端截斷來增強，從而促進了疫苗制造和生產過程。先導截斷gE (aa 31-358)，以下簡稱tgE，在溶液中是一種均質單體，表現出優異的抗原性。并且，研究評估并比較了tgE與商用vOka LAV和Shingrix疫苗的免疫原性。

目的：使用AUC檢測rgE與tgE蛋白的沉降系數與分子量

型號：XL-A，An60-Ti

實驗數據：

圖B. 純化后tgE蛋白的沉降速率分析。用c(s)法和c(M)法分別測定了tgE的沉降系數和分子量。黑色表示tgE，藍色表示rgE

實驗結果：

在本研究中，我們研究并證明了gE蛋白可以從大腸桿菌中表達和純化，然后用合適的佐劑配制成亞單位疫苗，不僅能獲得強大的中和效價，而且還能獲得良好的免疫應答反應。

來自大腸桿菌的tgE蛋白表現與昆蟲細胞來源的rgE蛋白一樣好，這表明tgE蛋白有希望成為候選疫苗。以tgE為抗原不僅可能誘導高IgG滴度，也降低了病毒潛伏期的潛在風險，而且還可能誘導高CMI。總的來說，本研究提供了一種更為經濟的VZV疫苗開發策略。

AUC實驗條件：

• 使用貝克曼XL-A型分析超離心機和An60-Ti轉子(貝克曼庫爾特，美國)

• 蛋白質樣品濃度0.8 mg/mL，轉子轉速設置為30000 rpm (~65,520×g)。

• 沉降系數使用c(s)方法和Sedifit軟件計算得到

Bibliography

Chen, T., Sun, J., Zhang, S., Li, T., Liu, L., Xue, W., Zhou, L., Liang, S., Yu, Z., Zheng, Q. and Yu, H., 2023. Truncated glycoprotein E of varicella-zoster virus is an ideal immunogen for Escherichia coli-based vaccine design. Science China Life Sciences, pp.1-11.

Process Development of a SARS-CoV-2 Nanoparticle Vaccine

SARS-CoV-2 納米顆粒疫苗的工藝開發

發表日期：12 March 2023

DOI:https://doi.org/10.1016/j.procbio.2023.03.014

摘要：

由 SARS-CoV-2 引起的全 球 COVID-19 大流行的結果之一是加快了疫苗開發時間表，以便及時提供治 療。例如，最近證明單克隆抗體療法的開發從載體構建到 IND 提交可以在五到六個月內完成，而不是傳統的使用 CHO 細胞的十到十二個月的時間線 [1,2]。該時間表基于利用現有的強大平臺進行上游和下游工藝、分析方法和配方。這些平臺也減少了輔助研究的要求，例如細胞系穩定性或長期產品穩定性研究。通過使用瞬態細胞系進行早期材料供應并使用穩定的細胞庫來制造毒理學研究材料，時間線持續時間進一步縮短。在類似的時間線內利用 CHO 細胞中的傳統生物制造工藝開發非抗體生物制劑提出了額外的挑戰，例如缺乏平臺工藝和額外的分析測定開發。在這份手稿中，我們描述了一種用于 SARS-CoV-2 的雙組分自組裝蛋白納米顆粒疫苗穩健且可重復過程的快速發展。我們的工作展示了一種成功的學術界與工業界合作模式，該模式可以快速有效地應對 COVID-19 全 球大流行，并可以提高我們對未來大流行威脅的準備。

儀器型號：Beckman Coulter ProteomeLab XL-I分析超速離心機

圖 1. CoV-RBD121-NP 的物理特性

最 終組裝 RBD 納米粒子的示意圖，體外組裝，通過以 1:1 的摩爾比（單體：單體）混合組分 A 和組分 B 實現。SARS-CoV-2 刺突蛋白的 RBD 以藍色顯示，16 殘基 GlySer 接頭將其連接到白色的 I53-50A 三聚體，灰色的 I53-50Atrimer 和紫色的 I53-50B 五聚體。

圖 13. 組分 A 與組分 B 孵育形成的納米粒子的沉降系數分布

AUC實驗條件：

1. 在 Beckman Coulter ProteomeLab XL-I 儀器上以 18,000 rpm 進行SV-AUC實驗，并記錄 280 nm 處的吸光度。實驗是在帶有石英窗的樣品池組件中進行的。在 20°C 下收集掃描數據。

2. 使用 SEDFIT v16.36 分析 SV-AUC 數據。在分析中，勾選frictional ratio, time invariant noise和彎液面。

3. 分別使用 DMA 4500 (Anton Paar) 密度計和 AMVn (Anton Paar) 粘度計測量緩沖液的密度和粘度。

REFERENCE

Diandra Martinez-Cano, Rashmi Ravichandran, Huong Le, H. Edward Wong, Bharat Jagannathan, Erik J. Liu, William Bailey, Jane Yang, Kelli Matthies, Hedieh Barkhordarian, Bhavana Shah, Nithya Srinivasan, Jun Zhang, Angel Hsu, Jette Wypych, Jennitte Stevens, Deirdre Murphy Piedmonte, Les P. Miranda, Lauren Carter, Michael Murphy, Neil P. King, Neil Soice, Process Development of a SARS-CoV-2 Nanoparticle Vaccine, Process Biochemistry,2023,ISSN 1359-5113，