多糖-蛋白結(jié)合疫苗
結(jié)合疫苗是指采用化學方法將多糖共價結(jié)合在蛋白載體上所制備成的多糖--蛋白結(jié)合疫苗。因僅靠多糖抗原不足以提供可靠的保護，多糖僅可誘導B細胞免疫，產(chǎn)生的抗體活性弱，且無法形成免疫記憶，多糖疫苗對嬰幼兒無免疫效果。而多糖結(jié)合載體蛋白，免疫反應性質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)變，可以增強免疫原性。如 B型嗜血桿菌（Hib）結(jié)合疫苗、腦膜炎球菌結(jié)合疫苗和肺炎球菌結(jié)合疫苗等，可有效誘導嬰幼兒免疫。

那么，為什么多糖與載體蛋白一定要共價結(jié)合嗎，如果是松散結(jié)合，位于同一濾泡樹突狀細胞（FDC）中，難道就不能誘導濾泡輔助T細胞（Tfh）反應嗎？

答案是不能。原因為當多糖與載體蛋白松散結(jié)合時，在FDC提呈過程中，蛋白質(zhì)和多糖無法同時被多糖特異性B細胞（BCR）結(jié)合，導致蛋白質(zhì)留存在FDC中，多糖被B細胞內(nèi)化，同樣無法被主要組織相容性復合物（MHC II）提呈于B細胞表面，多糖抗原依舊停留在B細胞內(nèi)化階段。

圖源：《Understanding Modern Vaccines:Perspectives in Vaccinology》

更好地實現(xiàn)共價結(jié)合

多糖-蛋白質(zhì)共價結(jié)合物的形成是基于蛋白質(zhì)分子中的氨基酸側(cè)鏈的自由氨基和多糖分子還原末端的羥基之間的羥氨反應，即Maillard反應。蛋白質(zhì)分子在水溶液中趨于形成各種高級結(jié)構(gòu)，一些反應基團被包埋于結(jié)果內(nèi)部。而多糖由于立體效應，具體強烈的取向性。因此，蛋白質(zhì)和多糖的反應條件較為嚴苛。

反應必須在低于蛋白質(zhì)變性的溫度條件下進行的，而且反應時還需控制反應體系中的較低水分活度使得蛋白質(zhì)中的氨基處于非聚集的反應狀態(tài)。此條件下，Maillard反應速度很慢，通常需要2-3天，甚至更長。

通常操作步驟：

多糖預處理：降低分子量，降低粘度

將多糖溶解在選定的pH緩沖溶液中

攪拌均勻后進行冷凍干燥

加入蛋白質(zhì)，在合適的溫度（如37°C）進行長時間反應

來自 IKA 的理想答卷

有沒有這樣一款設備，既能在反應過程中監(jiān)控粘度的變化，又能測pH，還能實現(xiàn)溫控和長時間的攪拌呢?!

理想答卷

IKA EasySyn 化學合成釜化學合成釜搭配 Starvisc 攪拌扭矩測量儀，實時顯示扭矩（對應粘度），用扭矩值精確控制，消除批次間的差異

Starvisc 攪拌扭矩測量儀，適合2-3天甚至是更長時間的連續(xù)、穩(wěn)定工作

7口釜蓋可同時集成：攪拌，溫度和pH。攪拌槳，溫度和pH均為PTFE材質(zhì)，耐化學腐蝕。

釜體密封性好，極限真空可達3mbar，可在釜體中實現(xiàn)真空干燥，同時隔絕污染。

操作安全：溫控管固定在支架上，由排氣排液閥再外接控溫，減少對夾套接頭的應力。玻璃釜體和攪拌頭調(diào)節(jié)下降終點有限位，即便調(diào)節(jié)高度時沒拿穩(wěn)，釜體也不會碰到桌面，使用更安心。

當然，為避免操作過程中帶來不必要的污染，加料可以通過蠕動泵來實現(xiàn)，直接連接到釜蓋上即可。我們還可以通過軟件實現(xiàn)條件式控制，譬如溫度和pH達到預設值后，啟動蠕動泵加料，啟動攪拌等。實驗方法和數(shù)據(jù)都可以完整記錄，分3級管理，完全符合國家食藥局的“藥品記錄和數(shù)據(jù)管理要求”。

免費試 用

現(xiàn)在 IKA 給大家備好了1L EasySyn 化學合成釜樣機，歡迎您們申請試 用。我們將按申請時間的先后順序盡快安排。

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疫苗

Vaccine

疫苗有過負 面報道，但是國產(chǎn)新冠疫苗遠銷海內(nèi)外，三年疫苗接種老少男女上億人次，事實證明，國產(chǎn)疫苗能浴火重生、安全可靠。

1、如何確保防疫針劑有效和安全？

藥理有效性需要通過液相質(zhì)譜儀等儀器查驗。

2、如何確保疫苗針劑的西林瓶密封無破損？

在歐洲、美國和印度制藥廠都采用雙光源X射線檢測，特別是凍干粉針劑無法通過燈檢來檢出西林瓶中的碎玻璃。

Thermo Scientific? Xpert? 側(cè)射型 X 射線檢查系統(tǒng)

3、如何保證注射的劑量是安全和有效呢？

 為什么有的孩子注射后會有不良反應？

 是否超過安全劑量？

生產(chǎn)疫苗制劑已經(jīng)采用全自動生產(chǎn)流水線，凍干粉和水針劑都采用自動灌裝，灌裝后的劑量檢測是采用動態(tài)檢重秤設備，一般疫苗要求控制重量誤差為10至30毫克；而傳統(tǒng)檢重秤稱量臺帶有電機、軸承和滾軸會產(chǎn)生振動影響稱量，無法保證一年后動態(tài)稱量精度達到10-30毫克，如同汽車開了一年需要保養(yǎng)才能上路，五年后的保養(yǎng)成本會越來越高，而且不能達到新車狀態(tài)。

核心技術

Core technology

賽默飛世爾科技公司成功突破了高速和高精度的瓶頸，其核心采用松帶專 利技術：稱重傳感器采用工業(yè)級、動態(tài)響應迅速的應變電阻稱重傳感器。Thermo Scientific Versa Rx選用的是針對動態(tài)檢重秤應用的應變電阻稱重傳感器，其松帶技術使稱量臺上沒有電機。首先，徹底消除電機振動，其次實現(xiàn)了稱量臺自重輕巧，可以忽略稱量臺本身重量，只考慮最 大產(chǎn)品重量，相對而言稱量臺的有效稱量精度提高到0.01%。換而言之，達到與電磁補償式稱重傳感器一樣的稱量精度，實現(xiàn)了高速高精度的夢想，在600件/分鐘時，根據(jù)包裝袋的大小不同，最 佳動態(tài)精度可達到10-30mg。

應用要點

Application key points

在醫(yī)藥行業(yè)采用檢重秤（或稱為：分選秤）主要用于檢測說明書缺損和確保灌裝量。要求測量速度高：一般在300件/分鐘以上；動態(tài)檢測精度高：一般要求正負偏差在100mg至300mg。

影響檢重秤動態(tài)精度的因素除了機器本身的機械振動影響以外，產(chǎn)品長度、產(chǎn)品內(nèi)部晃動以及環(huán)境因素都會影響精度。在相同稱量臺長度條件下產(chǎn)品長度越長，稱量時間越短精度會越差，克服方法是加長稱量段長度。

01、消除不利檢重秤的環(huán)境因素

基礎不堅固，基礎振動，檢重秤支撐腳懸空，檢重秤輸入端與前端輸送機之間的空隙過大，運行時輸入/輸出皮帶碰到秤量段和各種方向的氣流影響都會影響檢重秤的動態(tài)稱量。氣流影響可以通過增加防風罩解決。中包裝段所處位置經(jīng)常有叉車或液壓車裝卸貨物，因此基礎振動對檢重秤影響較大。

02、克服基礎振動

Thermo Scientific的Versa Rx檢重秤應用了DBSVAC(Dynamic broad spectrum vibration analysis and compensation) 動態(tài)寬頻振動分析和補償專 利技術，通過分析和補償基礎振動消除了基礎振動對檢重秤影響。

03、消除產(chǎn)品內(nèi)部晃動

液體藥品內(nèi)部的藥水晃動可以影響檢重秤動態(tài)精度，Thermo Scientific的VersaRx檢重秤從輸入段到稱量段到輸出段采用刀口設計，使液體藥品非常平滑進入稱量臺，從而克服了藥水晃動的稱量的影響。

在疫情仍未停歇的當下，做好個人防護對每個人來說既是簡單的，又是必要的。而群體防護的順利實施，則要歸功于抵抗新冠的各類疫苗了。這其中，就有免疫效果不錯的mRNA疫苗。mRNA疫苗具有廣泛的應用領域和顯著的治療優(yōu)勢，因而成為諸多藥企競相追逐的熱點。本期，小編就帶大家了解一下mRNA疫苗開發(fā)的工藝流程。

01 DNA原液供應

質(zhì)粒 DNA (pDNA) 是mRNA疫苗生產(chǎn)不可或缺的原材料，可用作 mRNA 的模板。在制備時，第一步是要提取病毒刺突蛋白的DNA序列，然后構(gòu)建帶有該序列的DNA質(zhì)粒，接著經(jīng)過擴增、純化、質(zhì)檢等諸多過程形成我們最終所需的DNA原液。

在mRNA疫苗開發(fā)應用方面，質(zhì)粒生產(chǎn)也面臨著諸多的壓力，尤其是 GMP的壓力。

02 mRNA原液制備 體外轉(zhuǎn)錄（IVT）是mRNA原液制備的主要手段。pDNA 可作為IVT的模板，合成所需的 mRNA 分子。 IVT的工藝比較復雜，除使用pDNA外，還需要添加合成mRNA的必要成分，如核苷酸和mRNA聚合酶。為提高mRNA穩(wěn)定性，降低其免疫原性，還需在 mRNA的5'末端添加加帽試劑。除此之外，合理設計5'或3'非翻譯區(qū)(UTR)也可以調(diào)整mRNA的穩(wěn)定性及蛋白質(zhì)的翻譯效率。 mRNA的純度影響著翻譯后蛋白的效力，因此，mRNA原液制備后的純化過程也是必不可少的，可采用TFF（切向流過濾）或SEC（尺寸排阻色譜）等方法來去除少量殘留雜質(zhì)。

03 mRNA包封 為防止疫苗有效成分mRNA進入細胞前被降解，可采用脂質(zhì)納米顆粒(LNP)對其進行包裹。具體過程為：將各種脂質(zhì)成分按一定的比例進行混合，溶解在乙醇或其他有機溶劑中；將mRNA溶解于水中，并用酸性緩沖液稀釋至合適濃度。配置好的兩相溶液在微流控設備上進行均勻混合，快速制備包裹mRNA的核酸脂質(zhì)納米顆粒。與微流控設備匹配的核心耗材為微流控芯片，圖1即為芯片內(nèi)部通道示意圖。 

圖1.微流控芯片通道示意圖

04 后處理 mRNA包封后需要進一步的純化。可通過超濾去除有機相以及未包封的游離成分。超濾過程中可以進行溶劑緩沖體系的置換，以及PH值的調(diào)節(jié)，最終復合物的濃度根據(jù)需求進行靈活控制。 

圖2.超濾管

 至于細菌、微生物的清除，一般采用0.22μm的除菌級過濾器即可。 純化后的mRNA-LNP溶液還可以添加必要的輔料成分，以提升產(chǎn)品長期保存的穩(wěn)定性。

05 儲存運輸 mRNA疫苗布局開發(fā)過快也帶來了些不可避免的問題，即需要低溫來保持疫苗穩(wěn)定，這大大的提升了對儲存和運輸?shù)囊蟆Ｔ趦Υ孢\輸過程中需進行持續(xù)的溫度監(jiān)測，以確保產(chǎn)品始終處于規(guī)定的溫度范圍，否則很難保證最終患者給藥時產(chǎn)品的安全性和有效性。 總結(jié)：mRNA疫苗有著廣闊的應用前景，其開發(fā)過程也必然充滿挑戰(zhàn)。了解開發(fā)的各個工藝流程，方能鎖定難點，各個擊破，向疫苗的成功開發(fā)更進一步。  

納米藥物制備系統(tǒng)

應用范圍：

● 核酸藥物發(fā)展的前沿方向

● mRNA疫苗的開發(fā)與挑戰(zhàn)

● 核酸脂質(zhì)納米粒科普——淺談儀器參數(shù)對結(jié)果的影響

● 核酸脂質(zhì)納米粒科普——超濾管規(guī)格

● 核酸脂質(zhì)納米粒科普——后處理

 
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腫瘤疫苗背景

腫瘤疫苗，是一種具有預防和治 療潛力的有吸引力的替代免疫治 療選擇，是近年研究的熱點之一。針對腫瘤相關抗原（Tumor-associated antigen,TAA）或腫瘤特異性抗原 (Tumor specific antigen,TSA) 的疫苗可以特異性地攻擊和破壞抗原過表達的惡性細胞，并由于免疫記憶而實現(xiàn)慢性治 療反應。因此，與其他免疫療法相比，癌癥疫苗提供了特異性、安全性和可耐受的治 療。

根據(jù)腫瘤抗原的組分，癌癥疫苗大致可以分為四種類型：基于 DNA 的疫苗，基于 RNA 的疫苗，基于多肽的疫苗和基于免疫細胞的疫苗。FDA 批準的首 個個性化腫瘤疫苗 PROVENGE (Sipuleucel-T) 是一種基于免疫細胞的疫苗，用于激素難治性前列腺癌的治 療。除此之外，Moderna，BioNTech 都在布局基于 mRNA 的腫瘤疫苗。

圖 1 腫瘤疫苗抗原呈遞平臺示意圖

腫瘤疫苗有效性評估方法

生物體接種疫苗后，腫瘤抗原被帶到淋巴結(jié)，進而激活抗原特異性的 B 細胞和 T 細胞，活化的 B 細胞產(chǎn)生的抗體及活化的效應 T 細胞會使腫瘤內(nèi)脹并誘導腫瘤細胞死亡。

圖 2 腫瘤疫苗誘導的免疫反應示意圖

如何有效的評估腫瘤疫苗的有效性是一個非常值得探討的問題，常用的腫瘤疫苗有效性驗證的方法，包括細胞因子檢測、CTL 活性檢測、T 細胞活化標志物檢測、抗體滴度檢測、ADCC 檢測等。

1、細胞因子檢測

細胞因子是由免疫細胞經(jīng)過刺激而合成并分泌的小分子蛋白質(zhì)，在免疫應答中起著非常重要的作用，因此可以通過細胞因子的分泌能力來反應疫苗誘導的細胞免疫的水平。常見的細胞因子有白介素 (IL) 、干擾素 (IFN)、 腫瘤壞死因子 (TNF) 等。下面比較了幾種常見的檢測方法。

ELISA 是一種非常經(jīng)典的細胞因子的檢測方法，例如在王曉東等人發(fā)表的關于胃癌疫苗研究的文章中，提到了用 ELISA 的方法檢測接種疫苗后小鼠骨 髓源樹突狀細胞（BMDCs）分泌細胞因子的能力，檢測方法如下：

BMDCs 在含有 10ng/mL GM-CSF 和 10ng/mL IL-4 的 X-vivo 15 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37℃下培養(yǎng) 6 天，然后以每孔 5×104 細胞的密度在 96 孔板中接種。以 5μM 或 10μM 的最 終濃度加入疫苗抗原，孵育 24 小時。使用小鼠 TNF-α 和 IL-12 p70 ELISA Ready-SET-Go 試劑組定量培養(yǎng)上清中的 TNF-α 和 IL-12 。首先在 4℃下用捕獲抗體包被 ELISA 板過夜，然后在室溫下依次加入阻斷液、細胞培養(yǎng)上清和檢測抗體，孵育 1h 。 最 后加入終止液和顯色劑，用酶標儀 (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。

檢測結(jié)果如下：

從檢測結(jié)果可以看出，T7（TLR7 激動劑）的存在可以顯著提升 ML/MB 抗原誘導的免疫反應。

圖 3 ELISA 法測定小鼠骨 髓樹突狀細胞 (BMDCs) 分泌

TNF-α (a) 和 IL-12 (b) 的水平

Ankita Leekha 等人發(fā)表的關于 SRAS-COV2 疫苗文章中，提到了用 ELISPOT 的方法評估細胞因子的分泌水平，可以作為參考。具體方法如下：

從小鼠中分離脾細胞和肺細胞，使用小鼠 IFNγ ELISpot 基礎試劑盒和小鼠 IL4 ELISpot 基礎試劑盒 (Mabtech, VA, USA) 進行 IFNγ 和 IL4 ELISpot 檢測。在 37℃ 下，在預包被抗體的 ELISpot 板中，用抗原刺激脾細胞和肺細胞，培養(yǎng) 16-18 小時。第二天，洗掉細胞，加入生物素化的檢測抗體。洗板后，加入 1:30000 稀釋的 Extravidi-ALP 偶聯(lián)物，室溫孵育 1 小時。洗板后，每孔添加 70μL 顯色液，孵育 20-30min，形成斑點，然后用水清洗，干燥。使用 Cytation 7 (BioTek) 對斑點進行量化。每個點對應一個單獨的細胞因子分泌細胞。

檢測結(jié)果如下：

圖 4 ELIPSOT 方法檢測小鼠脾細胞

和肺細胞分泌細胞因子的水平

2、CTL 活性檢測

疫苗誘導的細胞毒性 T 淋巴細胞 (CTL) 可以直接殺傷腫瘤細胞，起到抗腫瘤的作用，因此可以通過檢測 CTL 的殺傷效應來反應疫苗的效果。常用的檢測細殺傷效應的方法有很多，下表列舉了一些常用的方法。

王曉東等人發(fā)表的文章中提到了 LDH 檢測，檢測方法如下：

從接種疫苗小鼠的脾 臟中分離淋巴細胞（效應細胞）。EAC 腫瘤細胞（靶細胞）與淋巴細胞（效應細胞-靶細胞比例為 50:1）共培養(yǎng) 4h，使用乳酸脫氫 (LDH) 法測定細胞毒性。將培養(yǎng) 4h 后的培養(yǎng)上清加入在 ELISA 板中，室溫下加入底物溶液，孵育 30min。最 后，加入終止液終止反應，并用酶標儀 (BioTek) 在 490nm 處檢測光密度。

檢測結(jié)果如下：

相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組 CTL 細胞具有顯著的殺傷效應。

圖 5 LDH 法測定 CTL 介導的 EAC 靶細胞的裂解水平

3、抗體滴度及親和力檢測

腫瘤疫苗除了可以誘導細胞免疫之外，也可誘導體液免疫，對此可通過對抗體滴度及親和力進行檢測來反應疫苗抗腫瘤的效果，ELISA 是一種非常經(jīng)典的檢測方法。

上述關于胃癌疫苗的文章中通過 ELISA 方法測定小鼠接種疫苗后血清中總 IgG 含量，具體檢測過程如下：

小鼠接種疫苗后收集血液樣本，通過 3000g 離心 15 分鐘獲得血清樣本。ELISA 板預先在 4℃ 包被 BSA-MG1 過夜，然后在室溫下依次加載封閉溶液 2h，血清樣品 (1:50 稀釋) 和檢測抗體 1h。最 后，在體系中加入 p-NPP 底物 (Millipore) 和終止液，用酶標儀 (BioTek) 在 405nm 處記錄 OD 值。

檢測結(jié)果如下：

相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組抗體含量明顯上升。

圖6 ELISA法測定疫苗誘導的血清抗體水平

除此之外，在 Emily C. Gale 等人發(fā)表的關于 mRNA 遞送系統(tǒng)及輔劑研究的文章中，通過 ELISA 的方法測定了 mRNA OVA 模式疫苗誘導的 OVA 特異性抗體的絕 對含量及其親和力。具體檢測方法如下：

抗體濃度：小鼠接種加強疫苗后，采集血液樣品，血清按照 1:100 000 進行稀釋。采用 anti-OVA mouse IgG1 ELISA (Cayman Chemicals) 試劑，按照試劑廠家的說明進行 ELISA 實驗。使用 Synergy H1 Microplate Reader (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。根據(jù)標準曲線計算血清抗體濃度，表示 mg/mL。

抗體親和性：將 12 個梯度稀釋的血清與恒定濃度標記 HRP 的 anti-OVA 抗體 (3nM) 混合，并在 OVA 抗原包被的板中室溫孵育 2 小時，洗板后用 TMB 底物孵育，用 HCl 停止反應。測定 450nm 處的 OD 值。根據(jù)業(yè)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的單克隆抗體的共同親和力，假設對照抗體的 KD 為 1nM 對實驗組的 KD 值進行統(tǒng)計。這一假設僅影響報告的絕 對 KD 值，而不影響實驗組之間的相對差異。

檢測結(jié)果如下：

pIC 為雙鏈 RNA 結(jié)構(gòu)模擬物，圖E中比較了可溶性的 pIC 和不同納米顆粒遞送系統(tǒng)誘導的絕 對抗體含量，從圖 E 中可以看出 2B 遞送系統(tǒng)誘導的 OVA 特異性抗體含量最 高。從F和G可以看出 2B 遞送系統(tǒng)相對于可溶性 pIC 來說誘導的 IgG 親和力也顯著升高。

圖 7 pIC/PBAE NPs 增強體液免疫

4、ADCC 檢測

疫苗誘導體液免疫產(chǎn)生的抗體能夠捕捉目標抗原，阻斷這個靶分子的功能，也可以引導其他免疫細胞（如巨噬細胞和自然殺傷細胞）殺死表達抗原的靶細胞，在腫瘤治 療中，特別是血液腫瘤中，抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用 (ADCC) 起著關鍵作用，ADCC 常用的檢測方法包括細胞活力檢測、LDH 檢測、工程細胞株、Delfia、RTCA、細胞成像檢測等。

王曉東等人發(fā)表的關于胃癌疫苗研究的文章中，提到了 LDH 方法檢測 ADCC，檢測方法如下：

小鼠接種疫苗后，采集其血清樣本（1:25 稀釋），然后與 EAC 細胞（靶細胞）在 37°C 孵育 30min。使用小鼠 NK 細胞分離試劑盒從正常 BALB/c 小鼠中分離出自然殺傷 (NK) 細胞（效應細胞），與抗體標記的 EAC 細胞以效靶比 50:1 共培養(yǎng) 4 小時。采用 LDH 法 (Promega) 測定細胞毒性，檢測方法與之前提到的 CTL 活性檢測的方法一致。

檢測結(jié)果如下：

相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組產(chǎn)生的抗體具有顯著的殺傷效應。

圖 8 LDH 法測定血清抗體介導的 EAC 靶細胞的裂解水平

腫瘤疫苗生物學活性檢測解決方案推薦

本文介紹了腫瘤疫苗活性檢測的常用方法，包括細胞因子檢測、CTL 活性檢測、抗體滴度及親和力檢測、ADCC 檢測等方法，涉及到了酶標儀、成像系統(tǒng)、流式、RTCA、洗板分液系統(tǒng)等設備。Agilent 細胞分析事業(yè)部可以從多個角度為用戶提供從樣品處理，到結(jié)果檢測再到數(shù)據(jù)分析的全面解決方案。

疫苗檢測：

人生就像一段旅程，這段路程有時精彩， 有時荊棘，我們在精彩中綻放自我，在荊棘中奮勇前進。而在這段旅程中，保駕護航的疫苗不僅在傳染病領域提供了預防功能，新型疫苗在一些醫(yī)學疑難雜癥的預防和治 療領域有了新的突破。疫苗因其組成復雜，結(jié)構(gòu)龐大，工藝繁瑣，使得其檢測和分析更有挑戰(zhàn)。今天我們從疫苗中主成分檢測，工藝監(jiān)控和載體檢測三個角度分享一下疫苗檢測中的創(chuàng)新應用。

HPLC方法檢測疫苗中的主成分

蛋白質(zhì)疫苗在預防肝炎，帶狀皰疹病毒，HPV感染，新冠病毒和其他病毒感染起到了非常重要的應用，除了經(jīng)典的酶聯(lián)免疫的方法。液相色譜法因檢測方法簡單，重復性好，越來越多應用于蛋白總量的測定。核酸疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)中，HPLC技術的應用也解決了一些檢測難題。

SEC方法檢測目標蛋白總量

-BIOBASIC SEC 120 

BIOASIC SEC-120色譜柱檢測分子量比較小的用于豬的疫苗蛋白總含量測定，重復性良好。優(yōu)于酶聯(lián)免疫法偏差較大的結(jié)果。

SEC方法檢測人免疫球蛋白二聚體

-MAbPac SEC-1

SEC方法是檢測蛋白類制劑中的聚體分析的經(jīng)典方法。5 μm的300?孔徑的MAbPac SEC-1色譜柱可以快速分析人血白蛋白的聚體和單體。

疫苗分子量，結(jié)構(gòu)和組成不同，我們有不同排阻范圍的柱子選擇，下面是我們可以用于疫苗檢測的一些SEC柱子信息，可以用于快速蛋白純度測定和含量測定。

RP方法檢測蛋白組成-MAbPac RP

蛋白類疫苗需要檢測目標蛋白的含量，對于抗體類蛋白，可以采用親和色譜法快速定量，重組蛋白常用電泳法，免疫化學法等方法，很少使用反相色譜法進行。因為疫苗成分比較復雜，常規(guī)的硅膠基質(zhì)反相色譜柱，孔徑比較小，不耐堿洗等因素。新型的耐堿性聚合物基質(zhì)的MAbPac RP色譜柱，可以在檢測該重組疫苗蛋白，在0.1 mg/mL-2.5 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。用于蛋白疫苗定量檢測。

SEC方法檢測mRNA聚體

-BIOBASIC SEC 1000

尺寸排阻色譜法（SEC）是用于聚體分析的經(jīng)典方法，硅膠基質(zhì)的BIOBSIC SEC 1000可以將該2000 nt的聚體與單體分開。

RP方法檢測mRNA雜質(zhì)-DNAPac RP

反相色譜法是在變性條件下分析mRNA的雜質(zhì)，DNAPac RP 1500?的孔徑，可以用于不同堿基對大小的mRNA的分離。

IEC方法檢測mRNA雜質(zhì)-DNAPac PA200

離子交換色譜法在非變性條件下分析mRNA雜質(zhì)，可以用于監(jiān)控mRNA工藝中雜質(zhì)的去除情況。也可以用于成品中mRNA完整性的檢測。

HPLC方法檢測疫苗生產(chǎn)中的工藝組分

疫苗生產(chǎn)過程中會引入各類潛在風險物質(zhì)，在生產(chǎn)過程中會引進一些滅活劑，裂解劑，凍干保護劑等制劑，為了增加免疫持久性，調(diào)節(jié)親和力會加入一些佐劑，賦型劑，防腐劑等組分。特色液相色譜柱在CAD檢測器下可以快速進行這類組分的檢測。

RP方法檢測戊二醛-Acclaim 120 C18

戊二醛具有甲醇含量低，無致畸變，無積毒的特點，越來越被廣泛用于滅活。DNPH衍生后的戊二醛可以產(chǎn)生兩個衍生產(chǎn)物，兩個產(chǎn)物都可以在Acclaim 120 C18柱上得到很好的分離，在戊二醛在0.4 μg/mL-10.0 μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

陰離子交換反相方法檢測去氧膽酸

-Acclaim Surfactant

去氧膽酸是一種裂解劑，可以裂解病毒顆粒后經(jīng)過純化去除部分病毒成分，有效降低不良反應。Acclaim Surfactant Plus色譜柱采用陰離子交換和RP雙重保留機理，可以在CAD檢測器下分離和定量不同的去氧膽酸。

陰離子交換反相色譜法快速檢測吐溫80

-Retain AX 

吐溫80也可以用于裂解病毒顆粒，分光光度法因其萃取時間較長，導致分析時間比較長，使用Hypersep Retain AX色譜柱可以避免復雜的樣品前處理，直接定量生物制劑中的吐溫80含量。

陰離子交換，RP色譜法分析PEG組成

-Accliam Surfactant Plus

對聚乙二醇（PEG）評估時，希望在色譜上對其進行盡可能的分離，以獲得指紋譜圖，進行更好的質(zhì)量控制。Acclaim? Surfactant Plus是一款表面活性劑專用柱，尤其適合分析聚合物類的輔料，在對不同聚合度的PEG分析 時，都能夠獲得優(yōu)秀的峰型和分離度。

HILIC分析蔗糖-Hypersil APS-2

蔗糖，乳糖添加在活性物質(zhì)濃度較低的疫苗中，減少冷凍干燥時被升華的氣流帶走并且使凍干后的產(chǎn)品能形成較理想的團塊。Hypersil APS-2在分析蔗糖，乳糖時，峰對稱度好，定量準確。

RP分析膽固醇、DPPC、Lyso-PC和皂苷分析-Hypersil Gold PFP

HPLC方法檢測疫苗載體

RP分析納米脂質(zhì)體組成-Acclaim 300 C18

RP分析納米脂質(zhì)體組成-Accucore C30

納米脂質(zhì)體是一種非常有前景的藥物載體，可以有效保護mRNA等藥物運輸?shù)郊毎校|(zhì)體的組成和比例會影響藥物的包裹率和穩(wěn)定性，300?的Acclaim C18色譜柱和80?的Accucore C30色譜柱可以將納米脂質(zhì)體中的幾種組分分開。

IEC分析AAV包裹率-ProPac3R SAX 

AAV用于藥物載體中，其包裹率通常通過超速離心的方法測定，但是檢測時間比較長，儀器成本也比較高。新型的，單分散的3um的強陰離子交換柱ProPac 3R SAX可以將不同亞型的包裹的AAV與空殼的AAV分開，并且可以得到雜質(zhì)峰。

疫苗接種是預防控制傳染病最有效的手段，新冠疫情中多種不同技術路徑的疫苗均用于防疫中，其中核酸疫苗帶來重要變革。相信新的檢測手段和方法會在疫苗領域有更廣泛的應用。

       新冠病毒依舊在范圍內(nèi)“肆虐”，目前累計確診人數(shù)已超過1000萬人次；現(xiàn)在所關心的，除了病例數(shù)據(jù)，Z受關注的莫過于疫苗研發(fā)；疫苗被寄予徹底終結(jié)疫情的厚望，可以說，只有研發(fā)出有效的新冠疫苗，人類才能在這場沒有硝煙的“戰(zhàn)爭”中取得勝利，然而，世界衛(wèi)生組織不止一次強調(diào)疫苗的開發(fā)很難在18個月內(nèi)完成，而Z近幾年人類的疫苗研發(fā)往往耗時數(shù)年。

目前WHO網(wǎng)站帶來了好消息，

世界上共有10款候選疫苗已進入臨床試驗，

另有120多種疫苗處于臨床前試驗階段。

       此前世界衛(wèi)生組織（WHO）總干事譚德塞宣布與合作伙伴共同發(fā)起“合作加速開發(fā)、生產(chǎn)、公平獲取新冠肺炎防控新工具”的倡議。在歐盟主辦的應對新冠肺炎疫情國際認捐大會上，這一倡議得到廣泛支持，各國承諾提供74億歐元資金，用于推動新冠疫苗研發(fā)、生產(chǎn)以及公平分配等。

       各大制藥企業(yè)，都在進一步擴大和加快新冠疫苗研發(fā)，來遏制這場疫情。目前，深圳某生物YL科技有限公司在深圳高新區(qū)擬覓址投資建設mRNA藥物疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)基地，開展臨床前研究；該公司利用人工智能深度學習算法篩選抗原靶點，并以此為基礎平臺開發(fā)mRNA藥物疫苗，目前在研項目有新冠病毒體液免疫及細胞免疫疫苗與腫瘤新抗原ZL性疫苗，產(chǎn)品已完成初步研發(fā)。此前該公司與安東帕公司完成了納米粒度儀Litesizer的采購計劃，用于疫苗的進一步研發(fā)和臨床試驗。

       抗病毒疫苗的顆粒尺寸對其免疫原性和保質(zhì)期具有重要影響，安東帕Litesizer采用動態(tài)光散射 (DLS) 快速有效地測量滅活病毒粒子的顆粒尺寸，以及商用抗病毒疫苗中使用的鋁鹽佐劑的顆粒尺寸，通過模擬冷鏈中斷（熱處理、凍融）會引起顆粒大小分布的顯著變化，可發(fā)現(xiàn)Litesizer 是進行抗病毒疫苗質(zhì)量控制的有效工具。