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如何更好地合成多糖蛋白結合疫苗?

艾卡(廣州)儀器設備有限公司 2023-06-09 15:10:26 98  瀏覽
  • 多糖-蛋白結合疫苗
    結合疫苗是指采用化學方法將多糖共價結合在蛋白載體上所制備成的多糖--蛋白結合疫苗。因僅靠多糖抗原不足以提供可靠的保護,多糖僅可誘導B細胞免疫,產生的抗體活性弱,且無法形成免疫記憶,多糖疫苗對嬰幼兒無免疫效果。而多糖結合載體蛋白,免疫反應性質發生轉變,可以增強免疫原性。如 B型嗜血桿菌(Hib)結合疫苗、腦膜炎球菌結合疫苗和肺炎球菌結合疫苗等,可有效誘導嬰幼兒免疫。


    那么,為什么多糖與載體蛋白一定要共價結合嗎,如果是松散結合,位于同一濾泡樹突狀細胞(FDC)中,難道就不能誘導濾泡輔助T細胞(Tfh)反應嗎?


    答案是不能。原因為當多糖與載體蛋白松散結合時,在FDC提呈過程中,蛋白質和多糖無法同時被多糖特異性B細胞(BCR)結合,導致蛋白質留存在FDC中,多糖被B細胞內化,同樣無法被主要組織相容性復合物(MHC II)提呈于B細胞表面,多糖抗原依舊停留在B細胞內化階段。


    圖源:《Understanding Modern Vaccines:Perspectives in Vaccinology》


    更好地實現共價結合







































    多糖-蛋白質共價結合物的形成是基于蛋白質分子中的氨基酸側鏈的自由氨基和多糖分子還原末端的羥基之間的羥氨反應,即Maillard反應。蛋白質分子在水溶液中趨于形成各種高級結構,一些反應基團被包埋于結果內部。而多糖由于立體效應,具體強烈的取向性。因此,蛋白質和多糖的反應條件較為嚴苛。

    反應必須在低于蛋白質變性的溫度條件下進行的,而且反應時還需控制反應體系中的較低水分活度使得蛋白質中的氨基處于非聚集的反應狀態。此條件下,Maillard反應速度很慢,通常需要2-3天,甚至更長。

    通常操作步驟:

    多糖預處理:降低分子量,降低粘度


    將多糖溶解在選定的pH緩沖溶液中


    攪拌均勻后進行冷凍干燥

    加入蛋白質,在合適的溫度(如37°C)進行長時間反應


    來自 IKA 的理想答卷

    有沒有這樣一款設備,既能在反應過程中監控粘度的變化,又能測pH,還能實現溫控和長時間的攪拌呢?!


    理想答卷

    IKA EasySyn 化學合成釜化學合成釜搭配 Starvisc 攪拌扭矩測量儀,實時顯示扭矩(對應粘度),用扭矩值精確控制,消除批次間的差異


    Starvisc 攪拌扭矩測量儀,適合2-3天甚至是更長時間的連續、穩定工作


    7口釜蓋可同時集成:攪拌,溫度和pH。攪拌槳,溫度和pH均為PTFE材質,耐化學腐蝕。


    釜體密封性好,極限真空可達3mbar,可在釜體中實現真空干燥,同時隔絕污染。


    操作安全:溫控管固定在支架上,由排氣排液閥再外接控溫,減少對夾套接頭的應力。玻璃釜體和攪拌頭調節下降終點有限位,即便調節高度時沒拿穩,釜體也不會碰到桌面,使用更安心。



    當然,為避免操作過程中帶來不必要的污染,加料可以通過蠕動泵來實現,直接連接到釜蓋上即可。我們還可以通過軟件實現條件式控制,譬如溫度和pH達到預設值后,啟動蠕動泵加料,啟動攪拌等。實驗方法和數據都可以完整記錄,分3級管理,完全符合國家食藥局的“藥品記錄和數據管理要求”。



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如何更好地合成多糖蛋白結合疫苗?

多糖-蛋白結合疫苗
結合疫苗是指采用化學方法將多糖共價結合在蛋白載體上所制備成的多糖--蛋白結合疫苗。因僅靠多糖抗原不足以提供可靠的保護,多糖僅可誘導B細胞免疫,產生的抗體活性弱,且無法形成免疫記憶,多糖疫苗對嬰幼兒無免疫效果。而多糖結合載體蛋白,免疫反應性質發生轉變,可以增強免疫原性。如 B型嗜血桿菌(Hib)結合疫苗、腦膜炎球菌結合疫苗和肺炎球菌結合疫苗等,可有效誘導嬰幼兒免疫。


那么,為什么多糖與載體蛋白一定要共價結合嗎,如果是松散結合,位于同一濾泡樹突狀細胞(FDC)中,難道就不能誘導濾泡輔助T細胞(Tfh)反應嗎?


答案是不能。原因為當多糖與載體蛋白松散結合時,在FDC提呈過程中,蛋白質和多糖無法同時被多糖特異性B細胞(BCR)結合,導致蛋白質留存在FDC中,多糖被B細胞內化,同樣無法被主要組織相容性復合物(MHC II)提呈于B細胞表面,多糖抗原依舊停留在B細胞內化階段。


圖源:《Understanding Modern Vaccines:Perspectives in Vaccinology》


更好地實現共價結合







































多糖-蛋白質共價結合物的形成是基于蛋白質分子中的氨基酸側鏈的自由氨基和多糖分子還原末端的羥基之間的羥氨反應,即Maillard反應。蛋白質分子在水溶液中趨于形成各種高級結構,一些反應基團被包埋于結果內部。而多糖由于立體效應,具體強烈的取向性。因此,蛋白質和多糖的反應條件較為嚴苛。

反應必須在低于蛋白質變性的溫度條件下進行的,而且反應時還需控制反應體系中的較低水分活度使得蛋白質中的氨基處于非聚集的反應狀態。此條件下,Maillard反應速度很慢,通常需要2-3天,甚至更長。

通常操作步驟:

多糖預處理:降低分子量,降低粘度


將多糖溶解在選定的pH緩沖溶液中


攪拌均勻后進行冷凍干燥

加入蛋白質,在合適的溫度(如37°C)進行長時間反應


來自 IKA 的理想答卷

有沒有這樣一款設備,既能在反應過程中監控粘度的變化,又能測pH,還能實現溫控和長時間的攪拌呢?!


理想答卷

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Starvisc 攪拌扭矩測量儀,適合2-3天甚至是更長時間的連續、穩定工作


7口釜蓋可同時集成:攪拌,溫度和pH。攪拌槳,溫度和pH均為PTFE材質,耐化學腐蝕。


釜體密封性好,極限真空可達3mbar,可在釜體中實現真空干燥,同時隔絕污染。


操作安全:溫控管固定在支架上,由排氣排液閥再外接控溫,減少對夾套接頭的應力。玻璃釜體和攪拌頭調節下降終點有限位,即便調節高度時沒拿穩,釜體也不會碰到桌面,使用更安心。



當然,為避免操作過程中帶來不必要的污染,加料可以通過蠕動泵來實現,直接連接到釜蓋上即可。我們還可以通過軟件實現條件式控制,譬如溫度和pH達到預設值后,啟動蠕動泵加料,啟動攪拌等。實驗方法和數據都可以完整記錄,分3級管理,完全符合國家食藥局的“藥品記錄和數據管理要求”。



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對于消毒滅菌設備的使用注意事項,這對大家來說一直是日常比較關注的,那么,保養和存放的方式呢?大家有認真地了解和注意嗎?

日常保養和存放消毒滅菌設備的相關措施:  

①堆放滅菌物品時,應確保留出足夠的空隙,不能堵塞安全閥、放汽閥的出氣孔,以確??諝獾捻槙常_保安全。

②應將液體灌裝在耐熱玻璃瓶中進行滅菌,液體不應超過瓶體積3/4,瓶口不宜使用打孔的橡膠或軟木塞,而應用棉花紗塞。

③定期檢查安全閥,當安全閥不合格時應立即更換。

④滅菌結束后,不能立即釋放蒸汽,必須待壓力表指針回零后方可排放余氣。

⑤不要將不同類型、不同滅菌要求的物品放在一起進行滅菌。

⑥與蒸汽介質接觸引起爆炸或突然升壓性的化學物品,不能用滅菌器進行滅菌。

⑦壓力表應定期進行校驗,必要時及時進行更換。

⑧經常檢查密封圈密封性,并及時更換。

⑨消毒滅菌設備使用后,應將容器內的水清除,容器或電熱管上如有水垢也應進行清理,以延長壽命。

醫用滅菌器是于YL設備消毒滅菌的一種設備。該設備能徹底殺滅微生物體細菌、病毒等,具有消毒成本低,安全可靠及對器械損傷小等特點,通過全自動微電腦檢測使得操作簡單,滅菌過程自動化和標準化,滅菌結束自動打印結果,滅菌后的器械無任何化學殘留物,不需另行沖洗,減少派護人員勞動量,全過程密閉式滅菌,廢液無移無害,不污染空氣和環境。確保醫護人員的健康。

醫用滅菌器其優越的滅菌性能,臨床應用于各種腔鏡,內窺鏡、手術器械、齒科器械及其他醫用器械的一次性循環消毒滅菌。在醫院規模不斷擴大、醫用滅菌器的使用頻率不斷增多的情況下,預防性的維修保養對保證設備持續正常使用至關重要,必須高度重視,提高設備使用壽命。

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人透明質酸結合蛋白(HABP)ELISA檢測試劑盒

人透明質酸結合蛋白(HABP)ELISA檢測試劑盒本生生物公司供應:ELISA試劑盒,血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養皿,培養板,培養瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。

英文名:HABP   ELISAkit

產品貨號        產品名稱                          

BS-0354 人透明質酸結合蛋白(HABP)ELISA試劑盒

產品規格:96T/48T

品牌:本生

種屬:人

檢測波長:450 nm

所需樣本體積: 50-100ul

適用范圍:僅供科研

保存及有效期:2-8℃,六個月

檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

本生供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等

人透明質酸結合蛋白(HABP)ELISA檢測試劑盒

【獨特優勢】

1、產品種類齊全、質量可靠、價格優惠、靈敏度高、效果穩定、易保存、操作簡便

2、免費提供產品報價、實驗原理、產品用途及中英文說明書

三.本生ELISA試劑盒組成:產品組成48孔配置96孔配置Storage

人熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA檢測試劑盒

標準品:180ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃

標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃

酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃

濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃

酶標包被板1×481×962-8℃

封板膜2片2片RT

密封袋1個1個RT

說明書1份1份RT

人透明質酸結合蛋白(HABP)ELISA試劑盒

四.操作步驟:

 

五.注意事項:

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

六.標準曲線的繪制方法:

可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,繪制的ELISA標準曲線如下:

計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

0.5ml藍色離心管

0.5ml雜色離心管

0.5ml離心管

2.0ml可立滅菌凍存管

1.5ml無色滅菌凍存管(可立)

0.5ml無色滅菌凍存管(可立)

50ml離 心管圓底 PP 無酶無熱源無菌離心管

15ml滅菌離心管

15ML滅菌盒裝離心管

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天津ABI耗材-0.1ml光學96孔PCR板/8聯排管

SYBR? Select Master Mix

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elisa試劑盒是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法,由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點,已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。

 

產品用途:可用于科研實驗!


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