目前仍然沒有批準的預防性疫苗或治療藥物用于臨床HCMV感染，因此需要擴大預防和治療解決方案，以更充分地控制免疫功能低下個體的HCMV感染。到目前為止，雖然CMV疫苗和化學藥物對HCMV有效，但受到化學藥物的毒性、耐藥性以及血液來源產品缺陷的嚴重限制。基于單克隆抗體的治療是一種有效的臨床替代方案，具有克服現有藥物局限性的優點。

暨南大學生命科學與技術學院廖化新課題組在Microbiology Spectrum上發表文章，報道了從HCMV陽性的健康志愿者血液中分離得到的8個單克隆抗體，其中，抗體PC0012、PC0014、PC0035、PC0037、PC1和PC109結合五聚體和三聚體；抗體PC0031和PC0034僅與CMV五聚體結合，而不與三聚體結合。

為了驗證這些中和抗體與三聚體和五聚體的結合親和力，研究者選擇表面等離子體共振 (SPR) 技術對分離得到的抗體與已知中和抗體MSL-109的結合親和力進行了比較。

結果表明，PC0012、PC0014和PC0035結合五聚體的親和力KD分別為2.85×10^?10 M、3.23×10^?10 M和1.83×10^?10 M，結合三聚體的親和力KD分別為9.38×10^?11 M、1.00×10^?9 M和1.01×10^?10 M。與五聚體的結合親和力相比MAb MSL-109高出約4-7倍，與三聚體的親和力比MAb MSL-109高約20-230倍（圖1A和B）。

為深入了解MAbs PC0012、PC0014和PC0035識別的抗原表位與已知中和抗體MSL-109的關系，研究人員選用ELISA和Biacore實驗進行抗體競爭阻斷分析。

然而ELISA實驗中，研究者沒有發現組1中MAbs與組2中的MAbs競爭結合，反之亦然。

Biacore抗體競爭阻斷分析實驗中使用人抗體捕獲試劑盒將Anti-human Fc固定在CM5芯片表面作為捕獲分子，依次檢測抗體與HCMV五聚體或三聚體的結合。結果表明，PC0012阻斷了PC0014和PC0035與CMV五聚體的結合，而PC0014僅部分阻斷，PC0035完全不阻斷PC0012與CMV五聚體的結合。PC0014和PC0035沒有阻斷對方與CMV五聚體的結合（圖2）。

中和抗體MAb 9I6識別五聚體特異性位點5并阻斷CMV五聚體與細胞表面受體Nrp2的結合。在與CMV五聚體的結合強弱上，PC0034結合親和力KD為1.05×10^?10，而MAb 9I6與五聚體結合的親和力略低，僅為4.84×10^?10M。MAb PC0034完全阻斷MAb 9I6與CMV Penamer的結合，反之亦然（圖3）。

回顧整篇文章，研究者在取得志愿者血液樣品后，使用Ficoll-Paque PLUS分離外周血單核細胞 (PBMC) ，通過流式細胞術 (FACS) 和RT-PCR，借助?KTA分離純化 8個抗體。

使用Biacore表征了這8個單克隆抗體與五聚體、三聚體的結合活性，并且與已知中和抗體MSL-109和9I6的結合活性進行比較以及進行抗體間競爭阻斷分析。對于結合五聚體但無中和能力的抗體PC0034，通過純化共結晶解析了復合物的晶體結構，分析互作的關鍵位點，使用Biacore驗證了關鍵位點對于相互作用的影響。

總的來說，在抗體活性表征，競爭阻斷分析，關鍵結合位點分析中，Biacore均提供了核心數據。

Neutralization Epitopes in Trimer and Pentamer Complexes Recognized by Potent Cytomegalovirus-Neutralizing Human Monoclonal Antibodies.

Microbiol Spectr. 2022 Dec 21;10(6):e0139322.