目前仍然沒(méi)有批準(zhǔn)的預(yù)防性疫苗或治療藥物用于臨床HCMV感染，因此需要擴(kuò)大預(yù)防和治療解決方案，以更充分地控制免疫功能低下個(gè)體的HCMV感染。到目前為止，雖然CMV疫苗和化學(xué)藥物對(duì)HCMV有效，但受到化學(xué)藥物的毒性、耐藥性以及血液來(lái)源產(chǎn)品缺陷的嚴(yán)重限制。基于單克隆抗體的治療是一種有效的臨床替代方案，具有克服現(xiàn)有藥物局限性的優(yōu)點(diǎn)。

暨南大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院廖化新課題組在Microbiology Spectrum上發(fā)表文章，報(bào)道了從HCMV陽(yáng)性的健康志愿者血液中分離得到的8個(gè)單克隆抗體，其中，抗體PC0012、PC0014、PC0035、PC0037、PC1和PC109結(jié)合五聚體和三聚體；抗體PC0031和PC0034僅與CMV五聚體結(jié)合，而不與三聚體結(jié)合。

為了驗(yàn)證這些中和抗體與三聚體和五聚體的結(jié)合親和力，研究者選擇表面等離子體共振 (SPR) 技術(shù)對(duì)分離得到的抗體與已知中和抗體MSL-109的結(jié)合親和力進(jìn)行了比較。

結(jié)果表明，PC0012、PC0014和PC0035結(jié)合五聚體的親和力KD分別為2.85×10^?10 M、3.23×10^?10 M和1.83×10^?10 M，結(jié)合三聚體的親和力KD分別為9.38×10^?11 M、1.00×10^?9 M和1.01×10^?10 M。與五聚體的結(jié)合親和力相比MAb MSL-109高出約4-7倍，與三聚體的親和力比MAb MSL-109高約20-230倍（圖1A和B）。

為深入了解MAbs PC0012、PC0014和PC0035識(shí)別的抗原表位與已知中和抗體MSL-109的關(guān)系，研究人員選用ELISA和Biacore實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗體競(jìng)爭(zhēng)阻斷分析。

然而ELISA實(shí)驗(yàn)中，研究者沒(méi)有發(fā)現(xiàn)組1中MAbs與組2中的MAbs競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，反之亦然。

Biacore抗體競(jìng)爭(zhēng)阻斷分析實(shí)驗(yàn)中使用人抗體捕獲試劑盒將Anti-human Fc固定在CM5芯片表面作為捕獲分子，依次檢測(cè)抗體與HCMV五聚體或三聚體的結(jié)合。結(jié)果表明，PC0012阻斷了PC0014和PC0035與CMV五聚體的結(jié)合，而PC0014僅部分阻斷，PC0035完全不阻斷PC0012與CMV五聚體的結(jié)合。PC0014和PC0035沒(méi)有阻斷對(duì)方與CMV五聚體的結(jié)合（圖2）。

中和抗體MAb 9I6識(shí)別五聚體特異性位點(diǎn)5并阻斷CMV五聚體與細(xì)胞表面受體Nrp2的結(jié)合。在與CMV五聚體的結(jié)合強(qiáng)弱上，PC0034結(jié)合親和力KD為1.05×10^?10，而MAb 9I6與五聚體結(jié)合的親和力略低，僅為4.84×10^?10M。MAb PC0034完全阻斷MAb 9I6與CMV Penamer的結(jié)合，反之亦然（圖3）。

回顧整篇文章，研究者在取得志愿者血液樣品后，使用Ficoll-Paque PLUS分離外周血單核細(xì)胞 (PBMC) ，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù) (FACS) 和RT-PCR，借助?KTA分離純化 8個(gè)抗體。

使用Biacore表征了這8個(gè)單克隆抗體與五聚體、三聚體的結(jié)合活性，并且與已知中和抗體MSL-109和9I6的結(jié)合活性進(jìn)行比較以及進(jìn)行抗體間競(jìng)爭(zhēng)阻斷分析。對(duì)于結(jié)合五聚體但無(wú)中和能力的抗體PC0034，通過(guò)純化共結(jié)晶解析了復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，分析互作的關(guān)鍵位點(diǎn)，使用Biacore驗(yàn)證了關(guān)鍵位點(diǎn)對(duì)于相互作用的影響。

總的來(lái)說(shuō)，在抗體活性表征，競(jìng)爭(zhēng)阻斷分析，關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)分析中，Biacore均提供了核心數(shù)據(jù)。

Neutralization Epitopes in Trimer and Pentamer Complexes Recognized by Potent Cytomegalovirus-Neutralizing Human Monoclonal Antibodies.

Microbiol Spectr. 2022 Dec 21;10(6):e0139322.