單克隆抗體（mAbs）作為醫(yī)學領域中的“神奇子 彈”，具有高度特異性，是診斷和治 療的重要工具。自1986年美國FDA批準首 個用于腎移植排斥的抗CD3 mAb（Orthoclone OKT3）以來，已有超過100種單抗藥物獲得FDA批準。尤其在免疫腫瘤學領域，單抗及其衍生物（如抗體偶聯(lián)藥物ADCs、雙特異性抗體、納米抗體等）正成為領先的生物藥物。

單B細胞技術的發(fā)展

傳統(tǒng)的雜交瘤技術是首 個用于分離單克隆抗體的技術，但其存在一些局限性，如培養(yǎng)時間長和通量低。為了克服這些問題，研究人員開發(fā)了多種新技術和方法。其中，單B細胞技術作為一項突破性進展，利用了B細胞的單一特異性，通過單細胞PCR技術從單個B細胞中直接獲取抗體基因，隨后在體外表達出單克隆抗體。這種方法顯著縮短了抗體開發(fā)周期，并能夠獲得全人源化的單克隆抗體，從而增強了抗體的臨床應用潛力。

單B細胞技術的優(yōu)勢

高效率：相比傳統(tǒng)的雜交瘤技術，可以更快速地獲得單克隆抗體，尤其在應對新型病原體時，可以迅速從免疫動物或康復患者體內(nèi)分離出特異性B細胞。

高親和力：保留了B細胞的天然VH和VL配對，抗體的親和力高。

多樣性：從多種不同的B細胞中獲取廣泛的抗體多樣性，有助于發(fā)現(xiàn)新的治 療性抗體。

全人源性：能夠獲得全人源的單克隆抗體，降低抗體的免疫原性。

少量細胞需求：僅需單個B細胞即可進行抗體開發(fā)，降低了對細胞數(shù)量的依賴。

單B細胞技術的技術流程

單B細胞技術的開發(fā)流程包括動物免疫、單B細胞分離、抗體基因的擴增和克隆等5個環(huán)節(jié)，具體如下。

動物免疫：選擇一種抗原來免疫小鼠或兔等動物，刺激其產(chǎn)生特異性抗體，并對效價進行檢測。

單B細胞分離：通過各種方法如流式細胞分選(FACS)、微流控技術等從外周血或淋巴組織中分離出抗原特異性的單B細胞。

抗體基因的擴增和克隆：利用單細胞PCR技術擴增B細胞中的抗體基因，然后通過測序和分析選擇有潛力的抗體基因。

重組抗體表達：將選定的抗體基因在哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中表達，產(chǎn)生重組抗體。

抗體功能驗證：利用ELISA、流式細胞術、BLI、SPR等各種生物學實驗，驗證重組抗體的特異性和生物活性。

單B細胞克隆技術作為一種新興的抗體發(fā)現(xiàn)平臺，因其獨特的優(yōu)勢，在抗體藥物開發(fā)領域展現(xiàn)出廣泛的應用前景。隨著技術的不斷進步和優(yōu)化，預期該技術將在未來的生物醫(yī)藥研究中扮演更加重要的角色。

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參考文獻：

Pedrioli A, Oxenius A. Single B cell technologies for monoclonal antibody discovery. Trends Immunol. 2021;42(12):1143-1158. doi:10.1016/j.it.2021.10.008