如何進行柱效評價?第一種:手動操作
柱效測試是評估層析柱性能的關鍵步驟,有助于監測層析柱的性能變化,及時發現和解決可能影響實驗結果的問題。蛋白純化儀如何進行柱效評價,今天就帶大家來了解一下吧!
常規的柱效測試方法有以下兩種:
方法一 | 方法二 | |
平衡液: | 水 | 0.4M NaCl |
樣品: | 1%或2%丙酮 | 0.8M NaCl |
進樣體積: | 1% CV | |
流速: | 30cm/h或60cm/h的線性流速 | |
檢測信號: | UV280 | 電導 |
準備好對應的溶液后就可以開始柱效測試了!在設備上有兩種方式進行柱效測試:第一種是手動操作,第二種是設置方法。
要是用loop環進樣,只用沖洗A1,要是用系統泵進樣要先沖洗A2,再沖洗A1。
柱子體積小時,進樣體積小時可以用Loop環進樣:可以在進樣閥load狀態把樣品存進loop環里面(如要測的柱子進樣體積比較小沒有對應的loop環,可以用大一點的loop環多存一點樣品)
Loop環進樣有兩種方式:
第一種:重新打開手動控制頁面,線性流速會自動同步,直接在樣品環進樣中輸入進樣體積即可
第二種:手動切Inject狀態,運行到進樣體積時切回load狀態(只適應滿環進樣)
如果柱子體積大時,進樣體積大沒有對應的大Loop環時,可以用系統泵進樣。
第一種:在輸液泵進樣中選擇入液口,選擇A2、輸入好對應的進樣體積,點擊執行即可。
第二種:在流路中選擇切換到A2,同時在插入injection mark橫把坐標歸零,然后到進樣體積時再切回A1。注意:每次實驗只有第一次執行injection mark時會坐標歸零。
第三種:用A1平衡好之后,暫停,把A1放入樣品中到達上樣體積時,再暫停,把入液管線放回平衡液。這種方法不推薦,原因如下:死體積比較大會導致出峰時間延遲,測出柱效會比實際柱效高很多、在來回移動管線過程中容易引入氣泡。
無論是哪種手動操作,結束實驗室一定要記得選擇保存實驗結果。
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