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2025-01-10 17:05:28血管減壓和神經修復: 血管減壓和神經修復是一種針對血管壓迫神經引起的疾病（如三叉神經痛、面肌痙攣等）的手術治療方法。通過顯微外科技術，將壓迫神經的血管與神經分離，并在血管與神經之間置入減壓材料，以消除血管對神經的壓迫，從而緩解或消除癥狀。同時，對于受損的神經進行修復，促進神經功能的恢復。此方法具有創傷小、恢復快、效果確切等優點。

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2023-03-03 16:36:05熒光成像在血管神經外科手術中的優勢: 熒光素和ICG熒光血管造影改變了血管神經外科醫生的手術方式，它提供具有豐富信息的術中視圖。2021神經可視化峰會是一個匯集quan球神經外科醫生的特別活動，在此期間，A教授在一次家du網絡研討會上分享了他在熒光引導下的神經外科手術經驗，介紹了幾個臨床案例。學習要點了解熒光素鈉和ICG的歷史以及它們在血管神經外科的首次應用探討熒光技術在神經外科的優勢，及其如何為神經外科醫生提供有價值的信息觀看熒光引導下的神經外科手術視頻，包括動靜脈畸形（AVM）、搭橋和動脈瘤手術的臨床案例熒光成像在神經外科的應用：熒光素鈉和ICG的歷史及其首次應用熒光素鈉自20世紀60年代末以來一直用于神經外科，最初由醫生對其進行了描述，醫生在開顱時進行了硬膜外血管造影術。吲哚菁綠（ICG）在很久以后才被應用于評估腦血流。它是由醫生在21世紀初引入的，并決定將這種廣泛應用于眼科的技術轉移到神經外科。ICGzui早用于神經外科評估動脈瘤，并逐步應用于幾種神經外科病癥：評估旁路通透性、AVM手術、評估海綿狀血管瘤手術和神經腫瘤學中靜脈引流異常。目前，腦熒光血管造影使用ICG的情況更為普遍。熒光造影引導下的神經外科：熒光素鈉與ICG的優缺點熒光素鈉視頻血管造影有一些優勢，包括成本較低，精細細節的可視化，以及可以直接在顯微鏡下通過熒光過濾器進行觀察。ICG需要單獨的紅外攝像機，可以將信息顯示在不同的屏幕上。熒光素熒光也為無牽開器手術提供了有用的價值，這與手術創傷的降低密切相關。熒光素鈉的另一個優點是作為一種相對惰性的染料，急性毒性研究顯示盡管會誘發一些嚴重的過敏反應，但它對人類沒有特殊危害。此外，成本也非常低。熒光素鈉的缺點：它在血液中至少停留一小時，需要長時間等待后才能重復使用。ICG的半衰期為3至4分鐘，因此可以在短時間內進行第二次或第三次注射。但在某些病人群體中，如對碘過敏的病人或甲狀腺功能亢進的病人，它是禁用的。而且它價格昂貴。熒光造影在動靜脈畸形（AVM）手術中的應用在一名患有左額葉動靜脈畸形的患者中，選擇了對側入路，以避免優勢半球，并更好地控制進料器。使用FL560術中熒光素熒光模塊，可通過顯微鏡在手術野內精確地顯示時間、給藥器、靜脈和AVM周圍的短血管，并具有清晰的對比度。但在使用ICG時，用戶必須查看另一個屏幕，而且無法看到AVM的周圍環境。必須通過從顯示器轉移到手術野來進行解釋。熒光素熒光更容易在手術野中直接識別供血血管，并將實質圖像更好地可視化。圖1：用FL560熒光素熒光模塊觀察AVM與用ICG觀察AVM。圖片由A教授提供。熒光造影在搭橋手術中的應用在一例煙霧病患者中，施行了顳淺動脈-大腦中動脈搭橋術(STA-MCA)。熒光素鈉熒光對探索和檢查STA以及在手術野直接看到動脈的功能非常有用。這是了解搭橋手術工作方式的一種非常有效的技術。它提供了良好的血管和組織灌注的可視化，盡管厚壁血管不太明顯。圖2：在搭橋手術中使用FL560熒光素熒光模塊。圖片由A教授提供。熒光造影在動脈瘤手術中的應用在一名患有中動脈小動脈瘤的患者中，使用熒光素熒光支持夾閉。造影劑有助于暴露動脈瘤，并在手術野中直接觀察到穿支及其灌注情況。使用ICG可能會忽略這一點，因為它需要查看另一個屏幕，且呈現的是黑白圖像。在熒光素熒光下，閉塞的動脈瘤清晰可見。但由于動脈瘤手術往往很快，而且厚壁血管也不太明顯，所以無法進行重復使用。熒光素鈉可與ICG結合使用，兩者并不相互排斥。圖注：利用FL560熒光素熒光模塊進行動脈瘤夾閉。圖片由A教授提供。綜上所述，熒光素視頻血管造影具有手術野三維可視化的優勢，可以實時進行手術操作，尤其是對狹窄視野內的小血管。此外，它的成本更低。熒光素血管造影的缺點是無法觀察到厚壁血管中的血流，而且染料在血液中停留的時間較長。ICG血管造影技術和熒光素血管造影技術為神經外科醫生提供了重要優勢。

2022-11-03 10:04:33LS18平鋪光片顯微鏡成像案例—脂肪組織神經和血管的3D重構: 脂肪組織在機體能量穩態調控和體溫調節中發揮著重要的作用。脂肪組織由不同類型的脂肪細胞以及脂肪細胞前體、免疫細胞、成纖維細胞、血管和神經投射物組成。目前分析脂肪組織的免疫組織化學和免疫熒光方法主要是基于對具有相對高倍率成像的薄切片。然而，這種方法存在著明顯的局限性。首先，復雜的絲狀結構，如交感神經和脈管系統，已知在脂肪功能中起著重要的作用，薄切片僅捕獲一小部分組織，這可能導致結論因分析的組織部分不同而產生差異，很難通過薄切片進行評估。其次，由于脂肪組織獨特的無定形形態特征，很難僅根據切片染色來評估脂肪組織的三維結構。鑒于這些因素，非常需要一種可提供整個脂肪組織的三維可視化并且保持高分辨率的方法。锘海生命科學自主研發的平鋪光片顯微鏡具有三維成像速度快、對比度高、低光毒性、低光漂白等諸多優點。此外，依托于顯微鏡測樣服務工作積累的豐富的組織透明化、組織免疫熒光染色及成像經驗，锘海生命科學自主研發出了快速高效的锘海組織透明化試劑盒，大大提高樣本組織透明化的效率，為廣大科研工作者提供一套更為專業、完整的服務解決方案！我們使用TH對脂肪組織的神經進行標記，如下圖1、2所示，為小鼠附睪脂肪神經成像3D重構結果。該脂肪組織大小為6.0x8.5x2.5 mm，成像分辨率為橫向4 μm，縱向10 μm，成像時長僅4分鐘。圖1 小鼠附睪脂肪組織神經成像圖2 小鼠附睪脂肪組織神經成像（局部圖）我們使用SM22對脂肪組織的大血管進行標記，如下圖3、4所示，為小鼠附睪脂肪組織大血管成像3D重構結果。該脂肪組織大小為6.0x8.5x4.0 mm，成像分辨率為橫向2 μm，縱向10 μm，成像時長僅10分鐘。圖3 小鼠附睪脂肪組織大血管成像圖4 小鼠附睪脂肪組織大血管成像（局部圖）參考文獻：[1] Chi J, Crane A, Wu Z, Cohen P. Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue. J Vis Exp. 2018 Jul 28;(137):58271. doi: 10.3791/58271. PMID: 30102289; PMCID: PMC6126572.[2] Wang P, Loh KH, Wu M, Morgan DA, Schneeberger M, Yu X, Chi J, Kosse C, Kim D, Rahmouni K, Cohen P, Friedman J. A leptin-BDNF pathway regulating sympathetic innervation of adipose tissue. Nature. 2020 Jul;583(7818):839-844. doi: 10.1038/s41586-020-2527-y. Epub 2020 Jul 22. PMID: 32699414.

2022-10-14 09:04:14直播回顧 |「大成學堂」DA(VTA)→5-HT(DRN)神經環路調控神經厭食癥: 9月27日（周二）20：00，最/新一期「大成學堂」直播活動成功舉辦。本次直播，美國貝勒醫學院劉海蘭博士在線詳解神經性厭食癥新調控機制的前沿研究。該研究成果已發表在Nature Neuroscience上，題為“A D2 to D1 shift in dopaminergic inputs to midbrain 5-HT neurons causes anorexia in mice”。作為第一作者，劉海蘭博士在此次直播中細致講解了其研究的思路，并在線解答了大家的提問，獲得滿屏好評。沒有趕上看直播或想再回顧精彩內容的小伙伴掃碼即可查看直播回放首先，劉海蘭博士介紹了研究背景。神經性厭食癥作為一種高致死的精神疾病，近年來發病率顯著上升，但是其發病機制并不明確、治療手段也有限。目前基礎研究和臨床研究表明，神經性厭食癥的病人伴隨著多巴胺受體的多位點突變，這提示多巴胺神經系統的異常也與厭食癥的發生發展有關。同時研究表明位于中腦腹側被蓋區（VTA）的多巴胺（dopamine）神經元和位于中腦中縫背核（DRN）的五羥色胺（5-HT）神經元能夠參與調控包括進食在內的動機性行為，它們也被發現與神經性厭食癥的發病機制相關。基于這些研究背景，隨后劉海蘭博士分享了研究的詳細情況。其團隊利用TPH2-CreER小鼠模型開展了系列實驗，采用神經環路示蹤技術和電生理技術，首次發現了中腦腹側被蓋區-中縫背核（VTA→DRN）的DAVTA神經元→5-HTDRN神經元環路調控食欲和神經性厭食癥。主要研究過程，主要為以下四方面內容：低頻刺激抑制DAVTA→5-HTDRN神經環路并通過 DRD2 促進攝食行為高頻刺激激活DAVTA→5-HTDRN神經環路并通過 DRD1 抑制攝食行為DAVTA→5-HTDRN神經環路的活動調控神經厭食癥5-HTDRN神經元中的 DA受體可調節神經厭食癥狀直播時觀眾們提問踴躍，但是由于時間限制無法一一解答。在這里，我們特意整理出部分提問文字版的解答~聊天區部分問題詳解（文字版）1.研究神經性厭食癥除了常見的轉基因技術、電生理技術之外，是否有新的實驗方法能嘗試?答：在我們的課題中除了用了電生理，以及這些轉基因小鼠模型之外，我們也使用了化學遺傳學、光遺傳學方法去慢性或急性的操控神經元的活性，同時我們也使用了光纖記錄，實時記錄神經元的活性改變。2.aba小鼠的成功率和存活率有多少?答：在這個過程中我們的那個存活率，因為我們這邊動物protocal上限制的是如果小鼠的體重低于原始體重的80%，就必須要處死，所以我們算存活率是當小鼠體重降到它原來體重的80%的時候，我們就認為這只動物已經死了。所以在我們的aba模型中，通常到第三天左右就會有動物的體重低于原來體重的80%，然后隨著到第四天第五天可能會有50%左右的小鼠體重低于80%。3.激活DRN中5HT神經元如何能減少進食？答：5-HT神經元它在攝食中的作用已經有很多報道了。有一些報道說5-HT神經元可以投射至下丘腦的POMC和AgRP神經元。POMC和AgRP神經元在攝食中的作用也是被許許多多研究證實的。POMC神經元它可以抑制AgRP神經元，激活食欲。而5-HT神經元可以通過它的受體抑制AgRP神經元，同時激活POMC神經元活性來抑制食欲。想觀看本期全程回放識別下方二維碼即可收看「大成學堂」以建立“全球精英分享先進技術，解析領域內研究熱點”為宗旨的知識分享平臺。欄目開播以來已開展了超10場直播活動，數十名海內外知名學者在此講授生命科學學術理論、實驗技術等課程。歡迎大家進入「大成學堂」專題頁，學習相關課程。?掃碼入群，提前獲取后續直播課信息以及get到豐富的學術干貨~

2023-05-16 09:55:18應用筆記 | Upd2/胰島素調節能量感知神經回路: 弗雷德·哈欽森癌癥研究中心的研究人員利用Aivia軟件分析果蠅脂肪感知神經元，闡明了瘦素/Upd2和胰島素在能量感知神經回路中的相反作用。準確和持續監測能量儲備可以維持神經張力并驅動對于無脊椎動物和脊椎動物生存至關重要的行為決策。直到最近，脂肪感知神經元接收和反應脂肪儲存信息的精確機制還不為人所知。研究人員Ava Brent和Akhila Rajan證明了脂聯素Upd2誘導神經元結構改變，使其在營養過剩時釋放胰島素，并且胰島素本身通過對同一神經回路的負反饋恢復神經張力。分析與脂肪儲存相關的突觸結構變化對于Brent和Rajan的研究，成像和分割神經元是至關重要的，因為他們需要分析神經元形態和結構的微小變化。他們專注于軸突末端的突觸前結構（稱為boutons）的擴張。使用Aivia軟件，他們開發了一種圖像分割協議來分析boutons，從而使他們能夠系統地監測神經元結構。“Aivia的特點在于團隊可幫助像我們這樣試圖做出不同事物的用戶。在他們的幫助下，我們能夠開發出Aivia工具，將我們使用基礎形態報告生成的復雜成像數據編碼成對象。然后，這些對象使用屬性（如數量、體積、表面積和強度）進行描述。”Rajan說道。圖1. Drosophila大腦中PI區域STAT表達神經元中Syt-GFP標記的boutons的分割分析（根據[1]的許可重現）。一個穩態回路由此產生的Aivia圖像分析工具旨在應用于大量成像數據集，使Brent和Rajan能夠同時計算bouton數量和分析結構變化。擁有他們的Aivia工具，他們開始研究在果蠅的脂肪感知神經回路中管理不同信號的提示。Brent和Rajan喂食高糖飲食來模擬養分過剩，監測Upd2和胰島素水平以及突觸小結的數量。他們的Aivia圖像分割工具揭示了Upd2依賴性的突觸小結數量下降，因此突觸接觸減少。這種突觸接觸的減少釋放了對胰島素分泌的“夾子”，從而使激素能夠在營養過剩的情況下被釋放。進一步分析他們的圖像，Brent和Rajan還確定了涉及細胞骨架重塑的幾個基因的表達發生了改變，包括Aru和Bsg，這表明Upd2依賴性的突觸小結改變是由于肌動蛋白細胞骨架重組造成的。令人驚訝的是，在高糖飲食5天后，突觸小結數量恢復到基線水平，這表明存在負反饋機制。出乎意料的是，研究人員發現胰島素本身對神經回路產生了負反饋作用。圖2. 抑制反饋促進Syt-GFP標記的boutons增加以響應胰島素信號傳導（經[1]許可轉載）現在，研究人員已經知道了神經回路調節的具體方式，他們想確定重要的脂肪感受激素首先如何到達其靶神經元。“我們正在探究這些脂肪激素如何穿過血腦屏障，”Rajan說。“為了做到這一點，我們將再次依賴于成像脂肪激素轉運，并希望應用我們之前使用Aivia的技術和工具。”

2022-06-23 14:13:21ibidi科普知識系列|血管生成實驗小常識: 　　1、哪種細胞密度最適合我的實驗？　　　　通常，我們建議每孔使用5,000-10,000個HUVEC。但是，確定最佳細胞數對于使用μ-Slide血管生成從管形成測定中獲得最佳結果是至關重要。細胞密度取決于細胞類型和細胞大小。因此，在開始實際實驗之前，我們建議在非抑制條件下播種幾個細胞數并對管形成進行成像。然后，對于最佳測定條件，使用在您的實驗中產生最多管數的細胞密度。請記住，細胞通常不會在凝膠基質上增殖。請參閱：血管生成實驗實驗裝置優化和數據分析 |ibidi μ-Slide　　　　2、應該在哪個時間段內觀察細胞？　　　　管形成的持續時間取決于細胞類型和所使用的細胞外基質，應單獨確定。通常，HUVEC在 2-4小時后已經形成管。24小時后細胞開始發生凋亡，這導致從基質中脫離和管破裂。請參閱：血管生成實驗實驗裝置優化和數據分析 |ibidi μ-Slide　　　　3、是否需要活細胞成像裝置來每小時拍攝管形成測定的照片？　　　　非必須，通過顯微鏡對 μ-Slide 血管生成上的同一位置進行一致和精確的成像。可以使用顯示 x/y 坐標的顯微鏡載物臺或自動載物臺來完成成像。使用自動化平臺，可以將孔的所有位置（特別是每個孔的中心）保存到位置列表中，您可以在每個時間點訪問相應的位置。　　　　但是，使用完整的活細胞成像設置在顯微鏡上建立生理條件要方便得多。使用ibidi Stage Top 孵育系統等活細胞孵育裝置有助于在成像過程中提供穩定溫度和濕度條件，從而在體外可以直接進行視頻拍攝。　　　　4、是否可以使用 μ-Slide 血管生成在凝膠基質內培養細胞？　　　　可以，μ-Slide 血管生成非常適合在精確定義的3D基質中培養細胞。由于大界面的凝膠和頂部細胞培養基，凝膠中的條件可以通過更換上部儲液器中的介質來調整。　　　　5、應該在管形成實驗中使用含酚紅的凝膠還是不含酚紅的凝膠？　　　　對于使用μ-Slide血管生成的管形成測定中的相差顯微鏡，酚紅不會干擾圖片，并且由于其顏色，處理更容易。然而，當使用熒光顯微鏡時，酚紅可能會干擾探頭的波長。在這種情況下，應該使用無酚紅凝膠。　　　　6、是否需要將μ-Slide Angiogenesis血管生成載玻片放入培養箱的濕室中進行凝膠聚合？　　我們建議將μ-Slide血管生成載玻片放入加濕腔中進行凝膠聚合。雖然反應室對于聚合本身不是必需的，但它可以最大限度地減少蒸發的影響。在高流量孵化器中，防止蒸發的足夠百分比的濕度可能不會始終保持一致。 μ-Slide血管生成中的少量凝膠會很快變干，這會導致彎液面的形成。　　　　7、胎牛血清 (FBS) / 胎牛血清 (FCS) 濃度是否會影響管形成實驗中的管形成和降解速率？　　　　一般是的。這取決于所使用的細胞類型或細胞系。當提供濃度高達 10% FCS 的細胞培養基時，我們在 μ-Slide 血管生成中觀察到典型的原代細胞 (HUVEC) 管形成和 Matrigel? 上的幾種內皮細胞系。但是，我們建議分別優化每個細胞系的 FBS/FCS 濃度。　　　　8、您是否推薦使用減少生長因子的 Matrigel? 進行管形成分析？　　對于使用μ-Slide血管生成的管形成測定，我們使用了減少生長因子的 Matrigel? 和未減少的 Matrigel?。請參閱：腫瘤學必備 | 血管生成實驗介紹　　　　9、我們希望使用減少了生長因子的 Matrigel? 和無血清培養基以及 50 ng/ml VEGF。這足以刺激管的形成嗎？　　　　可以，這種組合足以刺激ibidi血管生成實驗室器皿中的管形成，而培養基中沒有任何額外的生長因子。　　　　10、除了 Matrigel? 之外，您在試管形成實驗中是否有使用其他凝膠的經驗？　　　　原則上，任何凝膠都可用于μ-Slide血管生成管形成實驗。細胞可以附著在表面上是很重要的。膠原蛋白、纖連蛋白和層粘連蛋白為細胞粘附提供了重要的結合基序。　　　　11、什么是管形成實驗合適的陽性和陰性對照？　　　　建議使用陽性和陰性對照來減少管形成實驗中的變量。陽性對照是預期細胞在其中形成血管的樣本（取決于實驗設置），從而向研究人員表明該實驗已正確進行。陰性對照是與所有其他樣品以相同方式處理的樣品，但預計不會顯示任何實驗結果（例如，很少或沒有管形成）。　　　　ibidi血管生成實驗室器皿中管形成實驗的最佳陽性和陰性對照很大程度上取決于所使用的細胞、凝膠基質和一般實驗設置。因此，我們建議您查閱文獻，了解您感興趣的主題中成功使用的對照（陽性和陰性對照）。　　　　在下文中，您可以找到管形成測定中陽性和陰性對照的可能方法：　　　　如果需要分析特定化合物誘導血管生成的效力，則可以使用用已知血管生成誘導劑（例如 VEGF 或 FGF2）處理的樣品作為陽性對照。濃度很大程度上取決于細胞類型和實驗設置。　　　　如果使用原代細胞，預篩選的內皮細胞系（例如，HUVEC）在用特定生長因子處理后表現出明確的反應，可以作為陽性對照。　　　　對于某些細胞類型，形成管的能力還取決于所使用的凝膠基質。作為陽性對照，內皮細胞應在含有饑餓培養基（不含生長因子或血清的培養基）的生長因子減少的 Matrigel?上顯示管形成。如果需要測試促血管生成物質，則使用饑餓培養基尤其重要，因為大多數細胞培養基都添加了生長因子。為了分析物質的真實效果，基質和培養基都必須不含任何生長因子。作為陰性對照，細胞可以播種在不同的基質（例如膠原蛋白 I）上，預計不會形成管狀。　　　　不影響細胞活力的管形成抑制劑（例如，蘇拉明或蘿卜硫素）可用作陰性對照。如果實驗的目的是測試抗血管生成物質，則使用這種類型的抑制劑尤其重要。　　　　如果用任何溶解的物質（例如，在 DMSO 或乙醇中）處理細胞，則僅使用溶劑作為陰性對照。　　　　12、是否有用于分析管形成實驗的推薦染色方案？　　一般來說，相差顯微鏡足以自動分析 μ-Slide血管生成中的標準管形成實驗。但是，如果您想研究某種標記，您可以應用您的標準方案（例如，用于免疫熒光染色），但要小心，以免損壞凝膠基質或細胞網絡。　　　　使用calcein的染色方案示例可參閱：腫瘤學必備 | 血管生成實驗介紹　　　　13、在開始實驗之前，我是否必須將 ibidi 血管生成實驗室器皿平衡到 37°C？　　　　不，不需要平衡 μ-Slide 血管生成。在室溫下儲存，可以立即用凝膠基質填充。由于μ-Slide 的開孔形式，加熱時從凝膠中逸出的氣體可以與大氣自由交換。　　　　14、完成實驗后，μ-Slide Angiogenesis和μ-Plate Angiogenesis 96 Well可以重復使用嗎？　　　　不可以，μ-Slide血管生成載玻片和μ-Plate血管生成96孔板是一次性耗材，僅供一次性使用。　　　　15、μ-Slide 血管生成是否有96孔版的？　　有。 μ-Plate血管生成96孔板具有與μ-Slide血管生成相同的“孔中孔”設計和凝膠體積 (10 μl)。 μ-Plate血管生成96孔可用作高通量管形成實驗的篩選板，具有完全的ANSI/SLAS (SBS) 和robotics兼容性。