- 2025-01-21 09:33:29炎癥因子風暴
- “炎癥因子風暴”這個問題與我的專業領域不完全吻合。炎癥因子風暴，也稱細胞因子釋放綜合征，是嚴重的免疫反應。它發生在感染、自身免疫病或某些治療后，免疫系統過度激活，釋放大量炎癥因子，引發高熱、低血壓等癥狀，甚至危及生命。如需更多信息，建議查閱免疫學或醫學相關文獻。
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炎癥因子風暴相關內容
炎癥因子風暴資訊
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- 針對新冠肺炎患者出現“炎癥風暴”問題 篩選藥物進入治療的序列
- 免疫系統是防衛病原體入侵最有效的武器，它能發現并清除異物、外來病原微生物等引起內環境波動的因素。
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炎癥因子風暴問答
- 2023-06-28 09:33:13小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒操作概要
- 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒操作概要 僅供體外研究使用，不用于臨床診斷! 本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體中小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)含量。 檢測范圍 0.781-50ng/mL 檢測限 0.35ng/mL 實驗原理 將小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)與連接于固相載體上的抗體結合，然后加入生物素化的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值)，計算樣品濃度。 試劑盒內容 試劑名稱數量試劑名稱數量 96孔板(預包被)196孔板覆膜2 標準品0.5ml×1標準品稀釋液1.5ml×1瓶 顯色劑A液6ml×1瓶樣品稀釋液6ml×1瓶 顯色劑B液6ml×1瓶終止液6ml×1瓶 酶標試劑6ml×1瓶密封袋1 濃洗滌液(30×)1×20mL使用說明書1 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒需自備的設備及試劑 1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱) 2. 單道或多道微量加液器及吸頭 3. 稀釋樣品的EP管 4. 蒸餾水或去離子水 5. 吸水紙 6. 盛放洗液的容器 試劑盒的儲存及有效期 1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。 2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。 注意： 試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在實驗后 1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒標本的采集與保存 1. 血清： 將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。 2. 血漿： 用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC或-80oC 保存，但應避免反復凍融。 3. 組織勻漿： 1) 取適量組織塊，于預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿); 2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復2次)。 3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。 4. 細胞裂解液： 1)貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集); 2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次; 3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞，再反復凍融)： i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂。 ii 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復3 次，使細胞溶脹破碎。 4)將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。 5. 細胞培養上清或其它生物標本： 請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。 注意： 1. 以上標本均需密封保存，4oC保存應小于1周，-20oC不應超過1個月，-80oC不應超過2個月。 2. 標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。 3. 實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒試劑準備 1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。 2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為50ng/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。 標本處理 1. 本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。 2. 實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。 3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。 4. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致 ELISA實驗結果偏差。 5. 若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素 較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。 6. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。 7. 建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差。 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒操作步驟 1. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 6. 溫育：操作同3。 7. 洗滌：操作同5。 8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。 10. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 注意： 1. 試劑準備：準備一次實驗所需要的酶標條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。 2. 加樣：實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡，將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時，個孔與一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。因此，一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內。推薦設置復孔進行實驗。 3. 溫育：為防止樣品蒸發，實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發，洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態，同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。 4. 洗滌：充分的洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液甩干。洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響的酶標儀讀數。如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實 驗過程中。 5. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘觀察一次)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 6. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。 7. 如果實驗室內濕度低于60%，推薦使用加濕器提高濕度水平。 實驗流程 1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備; 2. 加樣(標準品及樣本)50μL，37℃孵育30分鐘; 3. 洗板5次，加酶標試劑50ul，37℃孵育半小時; 4. 洗板5次;加入顯色液A，B各50ul,37℃孵育顯色15分鐘 5. 加終止液50μL，立即450nm讀數。 6. 計算 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒計算 各標準品及樣本O.D.值扣除空白孔O.D.值后作圖(七點圖)，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為縱坐標(或對數坐標)，O.D.值為橫坐標(或對數坐標)，繪出標準曲線(方程式應依回歸方程計算的R2值來定，以R2值越趨近于1為好)。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.30，根據樣品O.D.值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與O.D.值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的O.D.值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 特異性 本試劑盒用于檢測小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)，經檢測與其它相似物質無明顯交叉反應。 由于受到技術及樣本來源的限制，不可能完成對所有相關或相似物質交叉反應檢測，因此本試劑盒有可能與未經檢測的其它物質有交叉反應。 精密度 精密度用樣品測定值的變異系數CV表示。CV(%) = SD/mean×100 批內差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。 批間差：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。 批內差： CV
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- 2023-06-01 17:29:38DSC測試覆銅板PCB玻璃化轉變溫度Tg和固化因子ΔTg
- 本文介紹了用差示掃描量熱儀(DSC)測試覆銅板PCB玻璃化轉變溫度和固化因子ΔTg。印刷電路板（PCB, Printed Circuit Board）是重要的電子部件，是電子元器件的支撐體。PCB的樹脂成分發生玻璃化轉變時，PCB的整體力學性能和介電性能大幅減弱，故此PCB需要足夠高的Tg。DSC是測試Tg最為普遍的一種熱分析手段，在發生玻璃化轉變的過程中，樣品的比熱會出現特征性變化，即在DSC曲線上表現出臺階式的轉變。玻璃化轉變溫度Tg就是高分子聚合物最重要的特征性能之一，是FR-4基材等級最常見的劃分方式之一，也是IIPC-4101 《剛性及多層印制板基材規范》中最重要的性能指標之一。通常認為，玻璃化轉變溫度越高，層壓板的可靠性越高。PCB使用DSC玻璃化轉變溫度測試標準可參考IPC-TM-650 2.4.25。除了玻璃化轉變溫度以外，固化度也會影響材料的使用溫度、強度、膨脹系數、失效情況等性質。由于增強材料和其他填料的存在，PCB無法像聚合物基體材料一樣通過測量殘余固化熱來判斷固化程度。大量的研究和實踐經驗表明，Tg強烈依賴于固化程度。因此可以將材料再次經歷固化條件，對比再次固化前后的Tg變化，得出固化程度的結論。IPC-TM-650 2.4.25，將再次固化前后的Tg分別定義為Tg1和Tg2，將兩次Tg之差（Tg2-Tg1）定義為固化因子ΔTg。為了便于比較，標準還規定，以玻璃化轉變臺階的中點或拐點溫度作為Tg。圖1為某覆銅板PCB的DSC玻璃化轉變溫度結果。第一次加熱的Tg1為133.3℃，第二次加熱的Tg2為136.2℃。由此可以獲得固化因子ΔTg為2.9℃。環氧體系的PCB，目前行業中標準認為ΔTg大于5℃時，材料的固化程度不完全，需要提高固化程度；當ΔTg小于5℃時，產品固化完全。但要注意，即使ΔTg
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- 2022-06-13 09:09:42轉錄因子控制細胞表面蛋白“組合編碼”
- 細胞核內的轉錄因子是決定細胞命運、形態、和生理功能的中心指揮者，而在細胞膜表面的蛋白則通過與細胞環境的相互作用來執行這些指令。“轉錄因子→細胞表面蛋白→生理功能”的框架被認為存在于一切涉及細胞與環境交流的生物學過程中。例如在發育的神經元中，科學家們常常假設轉錄因子通過調節細胞表面蛋白的表達，來控制神經元之間連接，形成特定的神經環路。2022年5月24日，來自美國斯坦福大學與霍華德休斯醫學研究所的知名學者駱利群教授，帶領團隊在Neuron期刊上發表研究論文，用一個定義譜系的轉錄因子Acj6為例子，展示了轉錄因子如何“四兩撥千斤”，通過調節不同組合的表面蛋白的表達，控制不同神經元類型的連接。駱利群實驗室的博士生謝琦婧和李介夫博士為本文的共同***作者。早在2003年，駱利群教授團隊發現轉錄因子Acj6特異性表達在果蠅嗅覺系統投射神經元 （projection neuron，PN）的一個譜系（lineage）中，并控制這些神經元特異性的樹突靶向。不過，當時由于缺少直接測量特定細胞群體表面蛋白表達的方法，無法進一步知道Acj6以及其他轉錄因子如何通過細胞表面的蛋白質控制神經連接的特異性。直到2020年，駱利群教授、本文的共同***作者李介夫博士與合作者發展了一種高時空分辨率的蛋白組學技術，在方法上實現了突破。這種技術使得研究人員可以直接在完整果蠅大腦內對指定細胞類型的表面蛋白組進行高精度的生物素標記、富集和分析，也為系統地研究轉錄因子如何在多細胞生物的完整組織中塑造細胞表面蛋白質組提供了可能。▲相關閱讀：駱利群/Alice Ting聯合團隊《細胞》發文，創新技術找到多個神經連接調節因子在此次新研究中，研究人員運用這種蛋白組學技術，首先找到了轉錄因子Acj6調節哪些細胞表面蛋白來執行它的命令。他們分別在野生態和acj6功能喪失突變體中，對投射神經元進行了表面蛋白組的定量分析，然后基于蛋白組學的數據進行體內篩選，由此揭示了許多執行Acj6連接指示的分子。這些表面蛋白有一些正如作者的猜測，屬于細胞粘附分子，但還有一些則令人意外。比如，機械敏感離子通道Piezo。這種蛋白傳統上被認為只介導神經元功能，但他們發現，失去機械敏感離子通道活性的Piezo突變體可以與野生型Piezo一樣精準調控PN樹突靶向。“這個結果***展示了Piezo獨立于機械感覺離子通道的功能。”作者指出。 ▲在PN中敲除Piezo導致樹突錯誤的靶向（白色箭頭）接下來，為了建立轉錄因子Acj6與其調控的表面蛋白在樹突靶向中的功能性聯系，研究人員在表達Acj6的投射神經元中特異性地敲除了acj6，同時又在這些神經元中特異性地表達了Acj6促進表達的表面蛋白。實驗結果表明，在不同神經元類型中，Acj6通過調控不同組合的表面蛋白表達來指定這類神經元特異的靶向。“在不同神經元中，一個轉錄因子是通過調節相同、還是不同的細胞表面蛋白以指定它們的特異連接，這個問題過去并不清楚。”研究人員指出，“發育神經生物學長期存在一種假設，認為神經連接的特異性可能是由表面蛋白組合編碼（combinatorial code）控制，現在我們***為這一假設提供了實驗證據，展示了表面蛋白間的遺傳相互作用模式（加法、減法和協同）。”▲Acj6在不同神經元類型中通過調控不同表面蛋白（cell-surface executor）的表達來控制神經連接特異性正如科學家們在論文中提及的那樣，這篇文章為未來研究轉錄因子功能與機理提出了一個新的策略和方法的原型。RNA提取磁珠屬于納米生物磁珠的一種，主要作用是用于核酸提取過程中的RNA提取，粒徑分布在500nm左右，是洛陽吉恩特生物自主研發生產的高分子納米磁性微球，該磁珠懸浮時間長，磁響應時間迅速，對DNA甲基化過程中的提取環節提供良好的支持，可明顯縮短實驗時間，提高實驗效率，并在提取結果上保持穩定，配合核酸提取儀，更能實現快速的RNA提取。
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- 2023-06-16 14:30:12Spinsights離心洞察第四期-衡量離心效率的關鍵指標—K因子
- 需要擴大樣品體積或升高轉速以提高效率時，離心參數轉換時有發生。繁瑣的計算復雜且耗時，貝克曼庫爾特為您提供方便實用的軟件工具及在線解決方案，實現離心參數無縫轉換。簡化方案轉換RPM與RCF間的相互轉換根據來源不同，離心方案的描述單位可能是RPM（每分鐘轉數）或RCF（相對離心力）—— RCF又稱g-force（xg），一般用來表示最 大半徑（rmax）處的離心力。RCF和RPM可通過轉頭半徑進行換算，如需將方案轉換至新的離心管/瓶或轉頭，還需了解現有離心機及新離心機的更多信息。衡量離心效率的指標—— k 因子從一個轉頭（離心管）轉換到另一個轉頭（離心管），rmin 和 rmax均會改變，而且最 大相對離心力不能體現效率。因為K因子綜合了沉降路徑與相對離心力，所以可以表示沉降效率。同時K因子也能用以計算運行時間，在使用不同轉頭、離心管（瓶）、適配器及加樣體積的情況下，都能使方案轉換變得簡單輕松。離心專家”替代轉頭運行“小程序 適當轉換離心方案不僅需要匹配 RPM 或 RCF 值，追蹤轉頭及離心管尺寸規格也是一個繁瑣的過程。Optima XPN超速離心機配備eXpert離心專家軟件，其中的模擬功能可高效進行方案轉換。此外，在線轉頭計算器同樣可以實現方案轉換。小貝學習中心”離心參數計算器“小結在新的離心機上使用現有離心方案，必然涉及繁瑣的手工計算。貝克曼庫爾特為您提供便捷、快速的轉換工具。
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- 2023-03-06 09:15:32人體中這種“自私基因”會引發炎癥和年齡有關的疾病
- 人類基因組中充斥著這類“自私基因”，這些基因似乎對宿主沒有好處，反而只會通過在宿主基因組中插入新的拷貝來繁殖自己。LINE1逆轉錄轉座子，就是在人類中發現的***普遍的“自私基因”。大約20%的人類和小鼠的基因組是由LINE1組成的。 長期以來，研究人員一直懷疑LINE1s會導致癌癥和基因組不穩定。然而，這些基因組的“寄生蟲”所造成的危害遠遠超出了研究人員***初的設想。 近日，在《Cell Metabolism》雜志上發表的一篇論文中，來自羅切斯特大學(University of Rochester)的Vera Gorbunova和Andrei Seluanov教授等研究人員揭示LINE1逆轉錄轉座子會隨著年齡增長變得更加活躍，并可能通過引發炎癥，繼而導致與年齡相關的疾病。 通過了解逆轉錄轉座子帶來的影響，研究人員可以更好地識別細胞衰老的過程以及找到對抗影響衰老的方法。DOI:https://doi.org/10.1016/j.cmet.2019.02.014 當然，人類細胞已經進化出多種分子機制（比如基因沉默），來阻止像LINE1s這樣的自私基因。然而，這些機制在老化過程中變得效率較低，這就讓LINE1“得了空”，可以重新激活。 Gorbunova表示，當LINE1變得活躍，它們的一些拷貝會從細胞核外泄漏到細胞質中。細胞質中的任何DNA都會“拉響警報”，因為它們類似于入侵細胞的病毒。細胞質中的“衛士”通常會識別這些入侵者并觸發炎癥等免疫反應。這一過程本意是保護人類免受病毒和外來DNA的侵害，然而當它識別出泄露的LINE1拷貝時，就會觸發“假警報”。 研究人員發現，可以使用抑逆轉錄酶(一種催化LINE1 DNA形成的酶)的藥物來減少LINE1s。這些藥物***初是用來對抗HIV病毒。 使用這些藥物來減少LINE1s，不僅可以延長小鼠壽命，還可以改善其健康和減少炎癥。這意味著，LINE1基因引發的無菌性炎癥是一種新的衰老機制。有了這些關于LINE1及其對炎癥影響的新見解，研究人員希望開發出旨在抑LINE1的干預措施。這些干預措施可以作為治炎癥引發的與年齡有關疾病的新治方法，比如神經退行性變、癌癥、糖尿病和自身免疫性疾病。片段篩選磁珠作為高通量測序中的關鍵原料，是影響整體實驗結果的重要部分。如何對片段篩選磁珠進行穩定性的規模化生產，也是各類磁珠廠商要面臨的問題。洛陽吉恩特生物科技有限公司作為生物磁珠的生產廠家，對片段篩選磁珠的關鍵工藝進行長期、大量的優化，通過在實際應用場景中的反復測試，目的片段篩選準確，尤其對于200-500bp的片段，篩選效果良好穩定，并且磁珠的磁響應速度快，可以在較短的時間內完成實驗，篩選結果可直接進行下游環節。
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