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在高效液相色譜分析中,使用反相色譜柱可解決80%以上問題。而反相色譜柱中,使用Z多的是C18柱。
然而,色譜分析檢測的時,總是會碰到極性大的樣品,實在讓人很頭疼,一直是分析檢測領域面臨的挑戰和難題,經常遇到檢測靈敏度低、保留弱、分離度不理想、峰形不佳等問題。
如何解決極性化合物分離問題?常見的解決辦法有哪些?
一般極性化合物
對于一般極性的化合物使用C18即可解決,C18色譜柱我們平時使用Z廣泛,操作簡便,可提供的廠家、品牌Z多,選擇范圍也很大,同時色譜柱平衡迅速,也可兼容MS。對于一般極性化合物,檢測工作者可輕松解決。關鍵選擇一款分離度好,壽命長,性價比高的色譜柱即可。
Chromegabond WR C18(滿足您Z具挑戰分析需求)
品牌:PerkinElmer色譜柱(原ES Industries,2021年收購)
Chromegabond(簡稱:CMB) WR C18是一種通過多步法生產的高堿性去活性固定相;
特殊鍵合處理,具有高度疏水性和極高惰性,可用于酸類和堿類化合物的分析;
可用于分離含有極性基團和疏水基團的分子,也特別適合分離胺類和酸類化合物。
此外,氨基柱色譜柱家族中Z靈活的色譜柱,雖然分類上是正相固定相,卻可在正相、反相、離子交換或 HILIC 模式下使用。可用于極性化合物的正相分析,弱陰離子交換以及含水的反相液相分析。氨基柱被廣泛應用于木糖、乳糖、葡萄糖等糖類的反相分析模式中。
Chromegabond Amine(NH2)(卓越、經久耐用的氨基色譜柱)
品牌:PerkinElmer色譜柱(原ES Industries,2021年收購)
Chromegabond Amine是一種與硅膠鍵合的聚合物氨基相;
應用包括 HILIC、弱酸和糖;
Chromegabond 鍵合技術可生產出性能卓越、經久耐用的色譜柱。
CMB WR C18應用案例:西洋參中人參皂苷的測定
人參葉中兩種人參皂苷(人參皂苷Rg1、人參皂苷Re)的分離檢測的波長較低(203nm),且兩種皂苷保留性差異不大,對色譜柱的分離性能是較大挑戰。本實驗按照中國藥典2020版方法,使用CMB WR C18色譜柱對人參供試品中3種人參皂苷進行檢測,主要難點在于Rg1和Re滿足分離度要求,同時Rb1需要與相鄰雜質有效分離。
結果表明在上述實驗條件下,供試品中理論塔板數以人參皂苷Rg1計,理論塔板數66,468,遠遠大于藥典要求(N>6000),與Re的分離度可達2以上,Rb1與基質中的相鄰雜質也可以達到有效分離。
中強極性化合物
對于中強極性化合物,如果能在反相上保留,可選擇親水反相色譜柱,親水反相色譜柱是在C18柱上鍵合或嵌合的極性基團,從而能夠與極性化合物進行相互作用,從而增強對極性化合物的保留,另外,這類C18柱通常都能耐純水相,減少流動相中有機相的比例,也能在另一方面增加極性化合物的保留。
Epic Polar (專為極性分析物保留而設計的高密度填料)
品牌:PerkinElmer色譜柱(原ES Industries,2021年收購)
專為極性化合物特別設計的高密度填充的色譜柱,即使在 100% 水性流動相中,也能與鍵合的碳氫化合物相發生充分相互作用;
在這些高度水性條件下,我們的獨有的新型鍵合化學技術允許鍵合鏈在流動相中保持完全伸展;
Epic Polar 可以保留高水溶性化合物,如小分子有機酸、水溶性維生素、嘌呤和嘧啶、兒茶酚胺等極性化合物。
應用案例:
使用Epic Polar (100 x 4.6 mm, 3 μm) 對兒茶酚胺及相關化合物進HPLC 分析。兒茶酚胺及相關化合物由于極性大,在極短時間(3 min)內出峰,容易出現分離度差,峰形不佳等問題。Epic Polar能實現兒茶酚胺及相關化合物的較好分離。
強極性化合物
對于強極性化合物在反相上無保留,正相上不溶解。這時可使用HILIC色譜柱,PerkinElmer色譜柱(原ES Industries,2021年收購)擁有各種HILIC模式的色譜柱,滿足您各種HILIC分離的需求。
許多市售 HILIC 固定相都是轉化的正相色譜柱,導致方法不理想、分離能力較低且缺乏耐久性。我們的HILIC 色譜柱系列包括新款 Epic HILIC POH,專為 HILIC 色譜分析而設計,可以實現高性能分離,獲得可靠方法, 并提供較長的色譜柱壽命。
Epic HILIC POH(新型HILIC固定相)
其由多羥基聚合物涂層覆蓋并鍵合到硅膠;
該聚合物涂層可以增強固定相在 HILIC 操作條件下的行為;
可提供遠高于常規羥基和二醇型固定相的羥基含量。
Epic HILIC RP(新型HILIC固定相)
采用經過嚴格尺寸控制的超純硅膠;
可用于極性堿化合物的分離,其可與硅烷醇發生離子交換,從而能夠保留這些極性堿。
Epic HILIC RP(HILIC 和反相色譜的新型固定相)
它是含有極性和疏水性分析物的樣品的極佳選擇;
可以實現高性能分離,獲得可靠方法,色譜柱壽命也較長。
Epic HILIC PI(新型HILIC固定相)
與硅膠鍵合的芳香胺基固定相組成。
為極性胺化合物提供了優異的保留能力和峰形,也可以為酸類化合物提供優異的保留能力。
Epic HILIC FL(新型HILIC固定相)
其由與硅膠鍵合的氟化基固定相組成;
該組合物為極性鹵代物、極性胺和極性芳香族化合物提供出色的保留能力和峰形。
應用案例:
使用Epic HILIC RP (250 x 4.6 mm, 5 μm) 對苯二氮?類進行HPLC分析
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