一、牛羊口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒

通用名：口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）

二、包裝規格  96T×1/盒、96T×2/盒

三、預期用途

口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。用于檢測牛、羊血清中口蹄疫A型抗體，可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果評價。

四、=試劑盒原理

 系由預包被口蹄疫A型抗體的酶標板、抗體工作液、抗原液酶標記物及其他配套試劑組成，應用阻斷酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛、羊血清樣本中口蹄疫A型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結合；經洗滌后，再加抗體工作液孵育；經洗滌后加入酶標記物孵育；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體。

五、牛羊口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為12個月。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.待檢血清樣本恢復室溫、混勻待用。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥0.8，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。