Hieff Mut? Site-Directed Mutagenesis Kit是基于Hieff Clone?快速克隆技術的定點突變系統。使用本試劑盒，目標質粒擴增產物經DpnI消化、Hieff Clone?重組環化后直接進行轉化即可完成定點突變。該試劑盒由兩個模塊組成：Hieff? II Pfu DNA Polymerase擴增模塊和Hieff Clone?快速克隆模塊。Hieff? II Pfu DNA Polymerase超高的保真度顯著降低了擴增過程中引入新突變的可能性，其卓|越的長片段擴增能力，廣泛適用于長度小于20 kb的任何質粒擴增。Hieff Clone?快速克隆系統利用高效的同源重組反應替代傳統的退火成環反應。因此使用Hieff Mut? Site-Directed Mutagenesis Kit進行DNA定點突變時，引物設計更加靈活，且擴增反應不再需要以線性方式進行，極大減少了模板使用量，有利于原始甲基化模板的徹底降解。Hieff Clone?技術可以高效完成兩個PCR產物的無縫拼接，因此該試劑盒還能以單次擴增的方式對目標質粒上不連續的兩個位點同時進行突變。

Hieff Mut? Site-Directed Mutagenesis Kit中的重組酶Exnase經過優化，專門針對單堿基、不連續雙堿基定點突變。此外，如擴增產物特異，其DpnI消化產物可不進行DNA純化而直接用于重組反應。高度優化的反應緩沖液、快捷的操作流程以及極高的成功率，使得Hieff Mut? Site-Directed Mutagenesis Kit成為DNA定點突變試劑盒。

應用范圍

DNA定點突變

注：如使用本品對質粒進行定點突變，請使用甲基化酶無缺陷的宿主菌 (例如Top10、DH5α、JM109)擴增原始質粒！

產品組成

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。產品-20℃保存。有效期1年。

注意事項

1）引物設計時5’端反向互補區盡量選擇無重復序列，且GC含量比較均勻的區域。當這一區域內GC含量在40%～60%范圍之內時，重組環化效率將達到zui大。如這部分區域GC含量高于70%或者低于30%，重組環化效率會受到較大影響。

2）當兩突變位點相距小于50bp時，應將其視為一個突變位點，將兩突變引入同一條/對引物進行實驗。

3）DpnI只能識別甲基化DNA，請務必使用從甲基化酶無缺陷的宿主菌中擴增的質粒作為PCR模板。

4）長期放置、反復凍融會導致模板質粒斷裂、開環或降解，應使用新鮮制備的質粒作為模板。

5）質粒PCR擴增結果需高度特異，雜帶較多會影響實驗結果。

6）重組反應體系中應盡量避免金屬絡合劑(如EDTA)的帶入。因此，建議將DNA純化產物溶解在pH8.0的ddH2O中保存(常規膠回收試劑盒中的洗脫液可用pH8.0的ddH2O替代)，請勿使用TE進行DNA保存。

7）冷卻后的重組反應產物應在1h內進行轉化，且轉化前保持在冰水浴中。如需儲存，于-20℃凍存。盡量避免室溫較長時間放置或4℃長期儲存。

8）反應產物的轉化體積不應超過感受態細胞體積的1/10，否則會降低轉化效率。另外，當轉化的DNA濃度太高時，會抑|制轉化反應。將重組反應產物稀釋5倍后取1/5進行轉化。

9）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

10）本產品僅作科研用途！