培養方法

A3 人 T 淋巴細胞白血病細胞

懸浮，淋巴母細胞樣

編號： 100157

培養：37℃，5%CO₂ CM2-1 培養液

品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 離心管 15mL ；

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作

收貨須知：收貨當天發現異常，請在 24 小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若 長時間不使用，應過夜轉移至液氮保藏；離心管 15mL，收貨后先離心管原裝置于培養箱靜養 4h，然后再對細胞進行常規操作。復蘇 時每管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發服務。

培養條件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培養液。CM2-1 培養液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培養液，含谷氨酰胺。

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入 安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；④放入（37℃，5%CO₂）培養箱中，過夜換液，6-8 天長滿。

傳代：將培養好的懸浮細胞輕輕吹打均勻，分配至 3~6 個新鮮培養液皿中，輕輕搖勻后放入培養箱培養；

凍存：將懸浮細胞轉移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細胞，吹打均勻，分為 3 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質量記錄：根據復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結果如下：

項目	質量標準	復蘇記錄
復活性：	160h 長滿 80%	接種量 20%，過夜 18h 后觀察懸浮至 30%，136h 后密度達 80%
細胞形態：	懸浮，淋巴母細胞樣	CM2-1 培養液中，懸浮，淋巴母細胞樣，圓形，大多數聚團生長
附圖：
結論：	復活性好，且細胞形態無異常，合格

質檢員/日期： 張宜路 2020.3.16      審核員簽字：蘇丹

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