本文由 北京瑞輻特輻射測(cè)量?jī)x器有限公司 整理匯編

2024-09-28 01:01 1168閱讀次數(shù)

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• 劑量限值適用范圍小知識(shí)

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• Elisa實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識(shí)

  Elisa試驗(yàn)中我們會(huì)注意到Elisa試劑盒說明書上寫到封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，那首先了解一下蔗糖封閉的原理：1、Elisa實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒有封閉作用。2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)Elisa板子吸附（包被）的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。4、蔗糖溶液一般在Elisa板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理。至于哪一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證，但多數(shù)選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳（市售即可），0.4%的明膠，但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時(shí)候就不會(huì)產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。tween的作用：雖然不能單獨(dú)封閉，但和BSA在封閉時(shí)會(huì)起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會(huì)出現(xiàn)YY-附件：Elisa實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置Elisa實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，簡(jiǎn)單介紹一下Elisa試劑以及各種溶液的配置方法：（1）　Elisa實(shí)驗(yàn)包被緩沖液；（2）　Elisa實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液；（3）　Elisa實(shí)驗(yàn)稀釋液;（4）Elisa實(shí)驗(yàn)終止液；（5）Elisa底物緩沖液；（6）Elisa實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液；（7）　Elisa實(shí)驗(yàn)ABTS使用液；（8）ELISC。ELISA試驗(yàn)中的試劑（1）　Elisa實(shí)驗(yàn)包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:NaHCO31.59克NaHCO3　2.93克加蒸餾水至1000ml（2）　Elisa實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15MKH2PO4　　　　　0.2克Na2HPO412H2O　　2.9克NaCl　　　　　　　8.0克KCl　　　　　　　　0.2克Tween-20　0.05%　0.5ml加蒸餾水至1000ml（3）　Elisa實(shí)驗(yàn)稀釋液：牛血清白蛋白（BSA）0.1克加洗滌緩沖液至100ml或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。（4）　Elisa實(shí)驗(yàn)終止液（2M　H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。（5）　Elisa底物緩沖液（PH5.0磷酸檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M檸檬酸（19.2克/L）　　　　　24.3ml加蒸餾水50ml。（6）　Elisa實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）　　　10ml0.75%H2O232μl（7）　Elisa實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:ABTS　　　　　　　　0.5mg底物緩沖液（PH5.5）　1ml3%H2O22μl（8）Elisa實(shí)驗(yàn)封閉液：牛血清白蛋白（BSA）5克加洗滌緩沖液至100ml。值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長(zhǎng)期保存。為了保證Elisa實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要極ng確，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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